两种G20株CA16病毒颗粒的生物学特性的分析

发布时间：2017-08-31 05:10

  本文关键词：两种G20株CA16病毒颗粒的生物学特性的分析

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【摘要】：柯萨奇病毒A组16型(CA16)是为小RNA病毒科肠道病毒属成员,同时也是手足口病(hand, foot and mouth disease, HFMD)的主要病原体之一。近年来手足口病在亚洲环太平洋地区出现的大规模频繁爆发,已经成为亚太地区严重的公共卫生安全难题。针对同为手足口病病原的EV71病毒的灭活疫苗已经进入临床实验,而EV71灭活疫苗的实验研究表明对CA16病毒引起的感染交叉保护力低,为了扩大对手足口病的保护率,开发CA16的疫苗势在必行。 在CA16疫苗开发的过程中,通过用蔗糖密度梯度离心后会分离得到的两种不同的CA16病毒颗粒：一种是沉降系数低,缺陷型的空壳病毒颗粒P病毒颗粒,一种是沉降系数高,天然成熟的实心颗粒R病毒颗粒。本实验针对CA16这两种病毒颗粒的致病能力及免疫学特性做了相应的研究分析,分析两者间潜在的差异。本实验利用6%～54%的碘克沙醇(idoxanol)连续密度梯度离心,分离用PEG浓缩沉淀后的CA16病毒,将离心后得到的PR两组病毒颗粒成分进行相关的生化检测和免疫评价。 实验结果发现,电镜下两组病毒颗粒均含有缺陷型空心颗粒和天然实心颗粒,但R病毒颗粒成分中成熟颗粒要比P病毒颗粒成分中的多,同时R病毒颗粒的感染性滴度较高,通过qRT-PCR检测,R病毒颗粒的RNA含量也比P病毒颗粒高。用ELISA检测二者抗原含量,R病毒颗粒的抗原量却低于P病毒抗原含量。SDS-PAGE胶检测发现R病毒颗粒者含有VP1、VP2、VP3、VP4病毒蛋白条带,具有成熟病毒颗粒的标准结构,而P病毒颗粒则含有VP0、VP1、VP3的蛋白结构,二者在病毒结构上有较明显区别。 将两组病毒颗粒以104CCID50/只对新生乳鼠进行颅内注射,发现7日内均能使乳鼠死亡,病理学观察发现二者都出现不同程度的病理现象。而二者以相同抗原含量对小鼠进行肌肉免疫,免疫后的小鼠血清中能产生较高效价的中和抗体,但R病毒颗粒产生的中和抗体效价要比P病毒颗粒的高,二者存在统计学上的差异。免疫56天后进行的母体被动保护实验也显示二者能有效激起宿主的免疫反应。实验结果显示二者的免疫原性的有效性是值得肯定的,作为活病毒成分,P病毒颗粒抗原含量远比R病毒含量高, P能引起宿主机体的免疫反应的特点提示我们在制备疫苗的技术过程中,通过控制灭活条件,可以使P病毒颗粒成分成为CVA16(?)勺灭活疫苗额外的备选抗原。
【关键词】：CA16纯化 P-病毒颗粒 R-病毒颗粒 中和效价
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R373
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 引言7-15
• 一、实验材料与方法15-29
• (一) 实验材料15-17
• (二) 实验方法17-29
• 二、实验结果与分析29-40
• (一) 病毒浓缩与纯化29
• (二) 电镜结果29-30
• (三) SDS-PAGE电泳、Western Blot结果30-32
• (四) 病毒ELISA抗原检测与滴度测定32-34
• (五) 实时定量PCR结果34
• (六) P和R病毒颗粒成分的致病性34-36
• (七) 中和抗体效价36-37
• (八) 母体保护实验37-38
• (九) 乳鼠病理变化38-40
• 三、讨论40-44
• 四、小结44-45
• 参考文献45-51
• 文献综述51-64
• 参考文献60-64
• 附录64-68
• 附录一 主要缩略词表64-65
• 附录二 主要溶液的配制65-68
• 致谢68-69
• 研究生简历69-70

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前8条

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本文编号：763624