DNA免疫法制备抗小鼠TIGIT多克隆抗体及其功能鉴定

发布时间：2017-09-01 02:38

  本文关键词：DNA免疫法制备抗小鼠TIGIT多克隆抗体及其功能鉴定

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【摘要】：[目的]利用DNA免疫法制备抗小鼠TIGIT多克隆抗体。 [方法]运用生物信息学方法从基因数据库（GenBank）获取小鼠TIGIT基因序列,利用RT-PCR技术以小鼠脾脏cDNA为模板得到TIGIT基因片段，再利用PCR技术大量扩增出TIGIT编码区的基因片段，并连接至pcDNA3.1(+)真核表达载体。运用基因克隆技术构建TIGIT-pcDNA3.1(+)质粒。测序无误后，将TIGIT-pcDNA3.1(+)质粒大量扩增，，提取，纯化。然后，通过股四头肌肌内注射分别于D0、D14和D28天免疫SD大鼠（100μ g/只），最后一次免疫后10天收获血清。利用蛋白A+G琼脂糖珠亲和层析法纯化抗血清得到多克隆抗体，最后，通过western blot和免疫组化技术鉴定其特异性。 [结果]成功免疫SD大鼠，western blot显示于26Kd处可见明显的蛋白条带，与小鼠mTIGIT预测分子量相符，此结果证实制备的抗体可以与正常小鼠心、肝、脾、肾脏组织中表达的mTIGIT蛋白特异性结合。免疫组化发现mTIGIT蛋白广泛存在于正常小鼠心、肝、脾、肾等脏器，并主要定位于毛细血管内皮细胞。 [结论]利用DNA肌内免疫方法成功制备了特异性大鼠抗小鼠TIGIT多克隆抗体，为进一步研究TIGIT分子在小鼠系统的表达和功能提供有效的工具。
【关键词】：小鼠 TIGIT 质粒免疫 多克隆抗体
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R392
【目录】：

• 英文缩略词5-6
• 中文摘要6-7
• ABSTRACT7-9
• 前言9-10
• 实验材料10-14
• 实验方法14-29
• 实验结果29-37
• 讨论37-39
• 小结39-40
• REFERENCES40-41
• 综述41-51
• References48-51
• 附录51-52
• 致谢52

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 王昌青;杨兵;;DNA疫苗研究进展[J];中国畜牧兽医;2009年12期

2 杨丽琛;杨晓光;;DNA免疫研究进展[J];卫生研究;2006年01期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 王璐;DNAM-1-nectin-2信号途径介导人NK细胞对猪内皮细胞直接杀伤作用的研究[D];华中科技大学;2009年

本文编号：769469