大鼠嗅鞘细胞的纯化及活性检测

发布时间：2017-09-01 21:33

  本文关键词：大鼠嗅鞘细胞的纯化及活性检测

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【摘要】：目的采用改良差速贴壁联合胰酶限时消化法纯化大鼠嗅鞘细胞,并检测嗅鞘细胞的生物活性。方法分离新生7d的SD大鼠嗅球嗅鞘细胞,分组后采用改良的6h和18h两次差速贴壁法联合不同时段(1、3和5min)胰酶消化法纯化培养,观察不同时段纯化的嗅鞘细胞的形态特点及生长情况;应用FITC标记的神经生长因子受体p75抗体(兔抗鼠NGFRp75抗体)检测嗅鞘细胞并评估细胞纯度;应用CCK-8法和酶联免疫吸附法分别检测嗅鞘细胞在纯化后3~15d的增殖活性和分泌脑源性神经营养因子的含量。结果随着细胞的生长,梭形的嗅鞘细胞逐渐增多;改良差速贴壁联合胰酶限时消化1min、3min、5min法所得嗅鞘细胞纯度分别为(57.52±2.13)%、(78.95±2.60)%、(49.01±0.74)%,3min组最明显,组间两两比较差异有统计学意义(P0.05);改良差速贴壁法联合胰酶限时消化1min、3min、5min法所得嗅鞘细胞在纯化后7、9、11d时增殖的细胞数目和脑源性神经营养因子分泌量显示3min组最优,组间比较差异有统计学意义(P0.05)。结论改良差速贴壁(6h+18h)联合胰酶限时消化3min的纯化方法能获得较高纯度的嗅鞘细胞。
【作者单位】： 宁夏医科大学;宁夏医科大学人体解剖与组织胚胎学系;
【关键词】： 嗅鞘细胞 细胞纯度 细胞增殖 脑源性神经营养因子
【基金】：银川市科技发展项目(银财发[2011]265号) 宁夏自治区科技支撑项目(宁科计字[2012]17号) 宁夏医科大学博士建设开放课题(KF2010-18)
【分类号】：R329
【正文快照】： 嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)是一种介于周围神经系统和中枢神经系统的特殊神经胶质细胞,具有修复损伤神经和促进神经再生的功能[1-3],可分泌各种神经营养因子,如脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic fac-tor,BDNF)、神经营养素(neurotrophins,NT)

【参考文献】

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