不同浓度拟康氏木霉多糖对脐血来源DC成熟及免疫活性的影响

发布时间：2017-10-08 23:40

  本文关键词：不同浓度拟康氏木霉多糖对脐血来源DC成熟及免疫活性的影响

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【摘要】：目的：（1）观察不同浓度拟康氏木霉多糖对DC成熟性分化的影响； （2）观察不同浓度拟康氏木霉多糖诱导成熟的DC刺激同种异体T细胞增殖活性的影响； （3）观察不同浓度拟康氏木霉多糖诱导的成熟DC分泌细胞因子IL-12、TNF-α活性的影响。 方法（：1）采集5例健康足月孕妇脐带血分离单个核细胞，在细胞因子IL-4、GM-CSF的刺激下培养未成熟DC(immature DC，，imDC)； （2）用不同浓度（50μg/ml，100μg/ml，200μg/ml）拟康氏木霉多糖分别诱导imDC继续分化，采用流式细胞术分析不同处理的各组DC的髓系标记CD11c及其表面成熟性相关分子CD83、CD80、HLA-DR的变化； （3）采集健康成人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC)，用尼龙毛柱分离得到纯化的T淋巴细胞作为反应细胞；将上述不同浓度的拟康氏木霉多糖诱导产生的DC作为刺激细胞，混合培养72h，MTT法检测并计算细胞刺激指数，比较组间DC刺激T淋巴细胞增殖的活性。 （4）在4、8、16、24、48小时分别收集不同处理的各组DC上清液，ELISA法检测IL-12和TNF-α分泌水平的变化。 结果：（1）脐血单个核细胞能在GM-CSF、IL-4诱导下分化为imDC；脂多糖（LPS）能够诱导DC成熟，其表面成熟性分子HLA-DR、CD80和CD83的表达均增加，细胞具有典型的DC形态； （2）流式细胞仪检测各组DC表型结果显示：与诱导前比较：50μg/ml，100μg/ml，200μg/ml多糖组诱导的DC表面成熟性分子HLA-DR、CD80和CD83的表达均明显增高(p0.05，p0.05，p0.05)；与LPS诱导组比较：50μg/ml多糖组诱导的DC表面成熟性分子CD83的表达无明显变化（p0.05）；HLA-DR、CD80的表达较低（p0.05，p0.05）。100μg/ml多糖组诱导的DC表面成熟性分子HLA-DR、CD80的表达均无明显变化（p0.05，p0.05）；CD83的表达明显升高（p0.05）。200μg/ml多糖组诱导的DC表面成熟性分子HLA-DR、CD80和CD83的表达均无明显变化（p0.05，p0.05，p0.05）。 （3）各组诱导的成熟DC刺激T淋巴细胞增殖活性结果显示：与空白对照组比较：50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml多糖组诱导的DC刺激T细胞增殖能力均显著增强(p0.05，p0.05，p0.05)。与LPS诱导组比较：100μg/ml、200μg/ml多糖组诱导的DC刺激T细胞增殖能力均无明显变化（p0.05）；50μg/ml多糖组诱导的DC刺激同种异体T细胞增殖能力较低（p0.05）。 （4）各组作用48h的DC上清IL-12、TNF-α浓度比较结果显示：与LPS组比较：100μg/ml、200μg/ml多糖组诱导的DC分泌的细胞因子IL-12、TNF-α在上清液中的浓度没有显著变化（p0.05，p0.05）。50μg/ml多糖组诱导的DC分泌的细胞因子IL-12、TNF-α的浓度明显较低（p0.05）。取100μg/ml多糖组与LPS组按不同时间收集的DC上清，继续观察两组分泌的细胞因子TNF-α的时效关系。结果表明，LPS组诱导的成熟DC分泌细胞因子TNF-α时间较早，在8h左右达到顶峰；而后缓慢下降。而100μg/ml多糖组诱导的成熟DC分泌细胞因子TNF-α时间较迟，呈缓慢升高，至24h左右到达顶峰。 结论：（1）拟康氏木霉多糖能刺激人脐血来源DC成熟，以浓度为100μg/ml的多糖刺激效果最为显著； （2）拟康氏木霉多糖刺激成熟的DC具有诱导同种异体的T细胞增殖的能力； （3）拟康氏木霉多糖刺激成熟的DC具有分泌细胞因子IL-12、TNF-α活性，其分泌细胞因子TNF-α的活性24h左右到达峰值，且呈时间依赖性。
【关键词】：拟康氏木霉多糖 树突状细胞 免疫表型 细胞增殖 细胞因子
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R392
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-13
• 材料与方法13-19
• 结果19-28
• 讨论28-33
• 结论33-34
• 致谢34-35
• 参考文献35-38
• 综述38-55
• 参考文献51-55
• 作者简介及读研期间主要科研成果55

【参考文献】

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1 李丽华;喻丽珍;赵志刚;王国栋;;拟康氏木霉胞外总多糖免疫活性研究[J];赤峰学院学报(自然科学版);2013年07期

2 欧阳天贽;李小定;荣建华;;真菌多糖抗肿瘤及免疫调节作用研究进展[J];天然产物研究与开发;2006年03期

本文编号：996970