山羊乳腺上皮细胞细菌诱导型基因的筛选及其启动子活性分析

发布时间：2023-05-09 19:49

　　乳腺炎是奶山羊常见的疾病，是由细菌或真菌等病原微生物感染乳腺组织引起的炎症反应，不但影响了产奶量和奶质量，而且严重影响了山羊的健康。为了检测乳腺炎过程中哪些细胞因子有较高水平的表达，本研究分别用热灭活的金黄色葡萄球菌、停乳链球菌和大肠杆菌分别对萨能奶山羊乳腺上皮细胞刺激0、2、4、6和8h，然后检测LF、TNF-α、IL-1α、IL-1β、IL-8、TLR2、TLR4及BD-3这8组基因的mRNA水平变化。结果显示，大肠杆菌刺激6h后，LF、IL-1α、IL-1β和TLR2的表达量显著升高（P<0.05）；金黄色葡萄球菌刺激6h后，TNF-α、IL-1α、IL-1β、IL-8、TLR2和TLR4的表达量显著升高（P<0.05）；停乳链球菌刺激6h后，TNF-α、IL-1α、IL-1β和TLR2的表达量显著升高（P<0.05）。综合以上结果，在大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和停乳链球菌的刺激下IL-1α、IL-1β和TLR2三种因子都有较高水平的表达，为乳腺炎的抗炎机理研究奠定了基础。 在抗乳腺炎的机理研究中，细菌诱导表达系统的构建具有重要的意义，为了确定当细菌侵染山羊乳腺上...

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
综述
    第一章 山羊乳腺炎的研究概况
        1.1 乳腺炎的分类
        1.2 乳腺炎的症状及诊断
        1.3 乳腺炎的危害
        1.4 山羊乳腺炎的主要病因
            1.4.1 致病性微生物的感染
            1.4.2 环境污染
        1.5 山羊乳腺炎的预防与治疗
            1.5.1 提高挤奶过程环境卫生
            1.5.2 提高挤奶技术
            1.5.3 提高乳腺的自然抗病能力
            1.5.4 乳腺炎疫苗的使用
            1.5.5 中西药的使用
            1.5.6 抗乳腺炎新品种的遗传育种
        1.6 小结
    第二章 抗乳腺炎基因的研究进展
        2.1 乳腺炎的致病机理
        2.2 抗乳腺炎的基因
            2.2.1 乳铁蛋白
            2.2.2 白细胞介素
            2.2.3 肿瘤坏死因子
            2.2.4 Toll 样受体
            2.2.5 防御素
        2.3 β-防御素基因的研究进展
        2.4 抗乳腺炎基因的研究进展
        2.5 小结
实验
    第三章 山羊乳腺上皮细胞细菌诱导型基因的筛选
        3.1 材料
            3.1.1 组织
            3.1.2 菌株和质粒
            3.1.3 主要试剂
            3.1.4 主要仪器设备
        3.2 方法
            3.2.1 萨能奶山羊乳腺上皮细胞的培养
            3.2.2 乳腺上皮细胞攻菌前后 8 组因子的 mRNA 差异表达检测
        3.3 结果
            3.3.1 乳腺上皮细胞攻菌前后 8 组基因的 mRNA 定量表达检测结果
            3.3.2 乳腺上皮细胞攻菌前后 3 组基因的 western blot 结果
        3.4 讨论
        3.5 小结
    第四章 IL-1α、IL-1β和 TLR2 基因的启动子分析
        4.1 材料
            4.1.1 血液和细胞
            4.1.2 菌株和质粒
            4.1.3 主要试剂
            4.1.4 主要仪器设备
        4.2 方法
            4.2.1 山羊基因组 DNA 提取
            4.2.2 三个基因启动子区的扩增及启动子-EGFP-慢病毒载体构建
            4.2.3 293T 细胞的准备与转染
            4.2.4 慢病毒载体在乳腺上皮细胞中的转染及效率鉴定
        4.3 结果
            4.3.1 启动子-EGFP-慢病毒载体构建
            4.3.2 293T 细胞中 EGFP 蛋白的诱导表达
            4.3.3 乳腺上皮细胞中 EGFP 蛋白的诱导表达
        4.4 讨论
        4.5 小结
    第五章 萨能奶山羊β-防御素-3 基因的克隆和序列分析
        5.1 材料
            5.1.1 菌株和质粒
            5.1.2 主要试剂
            5.1.3 主要仪器设备
        5.2 方法
            5.2.1 引物的设计与合成
            5.2.2 细胞总 RNA 的提取和 cDNA 的反转录合成
            5.2.3 目的基因的克隆与测序
        5.3 结果
            5.3.1 萨能奶山羊 BD-3 基因 RT-PCR 扩增结果
            5.3.2 萨能奶山羊 BD-3 基因序列的测定与分析
            5.3.3 蛋白结构和功能预测
        5.4 讨论
        5.5 小结
全文结论
创新之处和进一步的研究课题
    创新之处
    进一步的研究课题
参考文献
致谢
个人简介



本文编号：3812285