牛传染性鼻气管炎病毒gD基因的原核表达及免疫学特性研究

发布时间：2023-05-18 03:57

　　牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious Bovine Rhinotracheitis Virus,IBRV)又称牛疱疹病毒I型(Bovine herpesvirus type 1,BHV-1),它会引起一种急性、热性、接触性传染病,在感染牛之后,主要表现出高热、呼吸困难、鼻炎、窦炎和上呼吸道炎症,称为牛传染性鼻气管炎(Infectious Bovine Rhinotracheitis,IBR),又称“红鼻病”或“坏死性鼻炎”[1]。世界动物卫生组织(World Organisation for Animal Health,OIE)将IBR列为法定报告动物疫病。gD蛋白是IBRV的主要结构蛋白,它可以同时诱导体液免疫和细胞免疫,gD也是病毒复制的必需基因,在病毒吸附和侵入宿主细胞过程中起重要作用,gD还是刺激机体产生中和抗体的主要糖蛋白。因此,在IBR的所有蛋白中gD被作为IBRV特异性抗原研究的首选。本研究以本实验室于2017年从呼市周边牧场分离到的IBRV为基础,对其进行鉴定,并命名为IBRVNMHS-1。并以IBRVNMHS-1基因组为模板,设计引物特异性扩增gD基因,与表达载...

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
缩略语表
1 引言
    1.1 牛传染性鼻气管炎的流行情况
        1.1.1 病原学
        1.1.2 流行病学
        1.1.3 临床症状和病理变化
    1.2 牛传染性鼻气管炎病毒的致病性
        1.2.1 免疫抑制
        1.2.2 病毒相关蛋白
    1.3 牛传染性鼻气管炎的诊断
        1.3.1 临床诊断
        1.3.2 病原学诊断
        1.3.3 血清学检测
    1.4 牛传染性鼻气管炎疫苗研究进展
        1.4.1 传统疫苗
        1.4.2 亚单位疫苗
        1.4.3 基因工程疫苗
        1.4.4 DNA疫苗
    1.5 选题的目的和意义
2 IBRV NMHS-1株的分离鉴定
    2.1 试验材料
        2.1.1 病料
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要仪器
    2.2 试验方法
        2.2.1 病料的采集
        2.2.2 病毒的分离与培养
        2.2.3 蚀斑克隆纯化病毒
        2.2.4 病毒滴度测定
        2.2.5 中和试验
        2.2.6 间接免疫荧光鉴定
        2.2.7 PCR鉴定
    2.3 试验结果
        2.3.1 病毒的分离培养结果
        2.3.2 病毒滴度的测定结果
        2.3.3 中和试验结果
        2.3.4 间接免疫荧光试验鉴定结果
        2.3.5 PCR鉴定结果
    2.4 讨论
    2.5 小结
3 IBRV gD蛋白的原核表达
    3.1 试验材料
        3.1.1 菌(毒)株及质粒
        3.1.2 主要仪器设备
        3.1.3 主要试剂
        3.1.4 主要溶液及培养基
    3.2 试验方法
        3.2.1 病毒基因组的提取
        3.2.2 引物的设计合成
        3.2.3 目的基因的PCR扩增
        3.2.4 胶回收目的片段
        3.2.5 重组质粒的构建
        3.2.6 重组质粒的鉴定
        3.2.7 重组质粒转化表达宿主菌
        3.2.8 重组蛋白的诱导表达
    3.3 结果
        3.3.1 gD基因PCR结果
        3.3.2 重组质粒pET-32a-gD鉴定结果
        3.3.3 重组蛋白的可溶性鉴定
        3.3.4 重组蛋白的最佳诱导条件
        3.3.5 重组蛋白的蛋白定量
    3.4 讨论
    3.5 小结
4 IBRV家兔模型的建立
    4.1 试验材料
        4.1.1 病毒及实验动物
        4.1.2 主要仪器设备
    4.2 试验方法
        4.2.1 病毒的纯化浓缩
        4.2.2 病毒感染家兔
        4.2.3 病毒分离
        4.2.4 间接细胞免疫荧光
        4.2.5 PCR检测
        4.2.6 病理组织学观察
    4.3 结果
        4.3.1 临床症状
        4.3.2 病毒分离结果
        4.3.3 间接免疫荧光结果
        4.3.4 PCR检测结果
        4.3.5 病理组织学变化
    4.4 讨论
    4.5 小结
5 gD蛋白的免疫学特性研究
    5.1 试验材料
        5.1.1 病毒及实验动物
        5.1.2 主要试剂
    5.2 试验方法
        5.2.1 Western blot检测
        5.2.2 gD蛋白亚单位疫苗的初步研究
    5.3 试验结果
        5.3.1 Western blot检测结果
        5.3.2 gD亚单位疫苗免疫试验结果
    5.4 讨论
    5.5 小结
6 全文结论
致谢
参考文献
作者简介



本文编号：3818626