利用单个B细胞抗体技术研制口蹄疫病毒O型全牛源单克隆工程抗体

发布时间：2025-02-10 19:35

　　口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)是引起猪、牛、羊等偶蹄动物口蹄疫的重要病原,有七个血清型。全球范围内FMDV O型的流行状况最为复杂,我国近年来就先后有3个拓扑型中的4个谱系的病毒株传入并造成流行,是目前防控难度最大的病毒血清型。FMDV O型不同谱系病毒的抗原结构存在明显差异,表现为抗原匹配性与交叉免疫保护效果的不同;抗原结构变异分析是口蹄疫防控产品研制需要重点关注的问题。单个B细胞抗体技术是目前筛选识别不同位点中和抗体的最新方法,为研究抗原结构变异提供了丰富的抗体工具。本研究首先用FMDV O型3个谱系的毒株免疫牛,然后采集抗凝血分离牛外周血单个核细胞(PBMCs)。利用生物素标记的FMDV O型146S颗粒作为诱饵抗原,通过流式细胞术从免疫牛PBMCs中分选抗原特异性单个B细胞;通过单细胞PCR技术从单个B细胞中扩增牛IgG抗体重链与轻链可变区(VH与VL)基因序列,将可变区基因插入含有牛IgG抗体恒定区的pcDNA3.4载体中,构建完整IgG抗体的表达质粒。将表达质粒转染中国仓鼠卵巢悬浮细胞(CHO-S)进行抗体表达与纯化。通过酶联...

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

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图2.1血清中FMDV特异性抗体效价的检测Figure2.1ThedetectionoftheFMDV-specificantibodytitersinse血清中FMDVO型特异性抗体的效价，我们采用液相LISA检测FMDVO型特异性抗体....

图3.1生物素标记抗原WB检测结果

3.1生物素标记抗原WB检测结量标准；1：生物素标记抗原；.1Analysisofbiotin-labeledantigeightmarker;1:Biotin-labeledantig及表型特征，FMDV特异性B细胞在感Cs，以分析FMDV特异性....

图3.2流式分选抗原特异性B细胞结果

20图3.2流式分选抗原特异性B细胞结果MDV特异性B细胞的分布；B：FMDV特异性B细胞在IgM+B细胞中的分布和比例；C：FMDV细胞在IgM-B细胞中的分布和比例Figure3.2Resultsofthesortedantigen-s....

图3.3IgG抗体可变区基因PCR扩增结果

图3.3IgG抗体可变区基因PCR扩增结果M：250bp-IDNA分子质量标准Figure3.3PCRamplificationofIgGvariableregiongenesM:250bp-IDNAmarkerPCR扩增出IgG抗体重....

本文编号：4032971