高浓度葡萄糖对鲍曼不动杆菌生物膜形成能力的影响

发布时间：2017-10-10 01:33

  本文关键词：高浓度葡萄糖对鲍曼不动杆菌生物膜形成能力的影响

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【摘要】：鲍曼不动杆菌（Acinetobacterbaumannii）是一种非发酵革兰阴性杆菌，广泛存在于自然界及医院环境中，属于条件致病菌，能引起一系列院内感染，如获得性肺炎、泌尿系统感染、败血症、继发性脑膜炎、创伤感染等，严重威胁着患者的生命。近年来，随着广谱抗生素，尤其是耐碳青霉烯类的广泛应用以及医疗置入物的增多，鲍曼不动杆菌引起的严重院内感染日趋严重，其感染的发病率和病死率也迅速上升。长期以来，人们对细菌的认识主要通过浮游的个体菌，然而近年来的研究表明，细菌主要是通过生物膜的形式附着于物体表面维系其生存。同时，国外有研究证实，高浓度葡萄糖能明显诱导细菌生物膜的形成。而由生物膜引起的感染却是鲍曼不动杆菌致病的重要原因。因此，研究高浓度葡萄糖对鲍曼不动杆菌生物膜形成的影响，将为防治其所致的感染提供有效的思路和方法。 本实验收集某院鲍曼不动杆菌30株，用琼脂稀释法测定其耐药性；用结晶紫染色法半定量测定其形成生物膜的能力，从中筛选出能形成生物膜的鲍曼不动杆菌，用不同浓度葡萄糖对其进行培养，同样采用结晶紫染色法进行测定，分析高浓度葡萄糖对鲍曼不动杆菌生物膜形成的影响；采用激光扫描共聚焦显微镜对其中三株形成生物膜能力为强阳性的鲍曼不动杆菌进行动态监测，进一步观察在不同浓度葡萄糖培养条件和不同时间点下，高浓度葡萄糖对鲍曼不动杆菌生物膜形成的影响。 一、鲍曼不动杆菌生物膜形成能力与其耐药率关系的研究 采用结晶紫染色法对30株鲍曼不动杆菌进行定量分析。以不同浓度葡萄糖培养此30株鲍曼不动杆菌作为实验组，同时设不加糖条件下培养的鲍曼不动杆菌为对照组。将阴性对照的平均A570值加标准差定义为Ac,用待测菌株3个复孔（A570）的平均值与Ac比较,则菌株生物膜形成能力可以分为四类:阴性(-):无生物膜形成,A≤Ac;弱阳性(+):AcA≤2×Ac;中等阳性(++):2×AcA≤4×Ac;强阳性(+++):A4×Ac。采用以上标准得出结果显示，该30株鲍曼不动杆菌临床分离株均具有生物被膜形成能力且形成试验均为强阳性。 利用琼脂倍比稀释法测定氨曲南注射液、头孢他啶注射液、哌拉西林、哌拉西林/舒巴坦、左氧氟沙星、头孢哌酮/舒巴坦、美罗培南、阿米卡星对鲍曼不动杆菌的最低抑菌浓度（MIC）。结果显示30株鲍曼不动杆菌临床分离株对头孢他啶、哌拉西林、阿米卡星的耐药率均为96.6%（29/30），头孢哌酮/舒巴坦、美罗培南的耐药率均为86.7%(26/30)，哌拉西林/舒巴坦、左氧氟沙星的耐药率分别为93.9%（28/30）、63.6%(19/30)。因此，该30株鲍曼不动杆菌均具有较强的生物膜形成能力，且具有多重耐药性。 二、高浓度葡萄糖对鲍曼不动杆菌生物膜形成能力的影响 首先对30株鲍曼不动杆菌的标本分布进行统计，，发现多数以老年患者居多（36.7%），标本类型主要为痰标本（76.7%），患者所在科室主要集中在神经外科（36.7%）、骨科（13.3%）、ICU（13.3%）和SICU（10%）等。 对上述30株生物膜形成能力为强阳性的鲍曼不动杆菌用不同浓度葡萄糖（5、7、11.1、16.7、20、30mmol/l）培养，同样采用结晶紫染色法对其形成的生物膜进行半定量检测。半定量实验数据经统计分析显示，随着葡萄糖浓度的增加，其吸光度呈上升趋势，在11.1mmol/L以后形成的生物膜要比不加糖条件下形成的生物膜多（p0.05），并且在葡萄糖浓度为11.1mmol/l之后各组吸光度值无差异（p0.05），呈平缓趋势。这说明高浓度葡萄糖能明显诱导鲍曼不动杆菌生物膜的形成。 三、激光共聚焦显微镜观察高浓度葡萄糖对鲍曼不动杆菌生物膜形成的影响 从30株鲍曼不动杆菌中挑选出生物膜形成能力最强的三株鲍曼不动杆菌为研究对象，采用不同浓度葡萄糖培养，在盖玻片上形成生物膜，分别于接种后12、24、36、48、60和72h取出玻片，采用免疫荧光技术标记细菌和多糖，激光扫描共聚焦显微镜（CLSM）观察鲍曼不动杆菌生物膜形成的动态过程，并测定其生物膜的厚度。 用CLSM观察显示，当葡萄糖浓度≥11.1mmol/L时，鲍曼不动杆菌形成成熟生物膜的时间缩短了，在24h左右便可形成成熟的生物膜，比不加糖组要提前24h；生物膜厚度的数据经统计分析得出，各个加糖组的厚度的最大值都落在12~36h范围内，并且各加糖组的厚度最大值均比不加糖组的最大值大（p0.05）。这表明，高浓度葡萄糖不仅能明显诱导鲍曼不动杆菌生物膜的形成，并且会缩短其生物膜形成周期。
【关键词】：鲍曼不动杆菌 生物膜 耐药性 葡萄糖 激光扫描共聚焦显微镜 免疫荧光技术 结晶紫法
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R378
【目录】：

• 目录4-5
• 中文摘要5-8
• Abstract8-12
• 前言12-14
• 第一部分 鲍曼不动杆菌生物膜形成能力与其耐药率关系的研究14-24
• 引言14
• 1 材料14-15
• 2 方法15-18
• 3 结果18
• 4 讨论18-21
• 附表21-24
• 第二部分 高浓度葡萄糖对鲍曼不动杆菌生物膜形成能力的影响24-31
• 引言24
• 1 材料24-25
• 2 方法25-26
• 3 结果26-27
• 4 讨论27-29
• 附表29-31
• 第三部分 激光共聚焦显微镜观察高浓度葡萄糖对鲍曼不动杆菌生物膜形成的影响31-46
• 引言31
• 1 材料31-32
• 2 方法32-34
• 3 结果34-35
• 4 讨论35-38
• 附图表38-46
• 课题小结46-47
• 参考文献47-52
• 综述52-60
• 参考文献57-60
• 缩略词表60-61
• 攻读学位期间发表论文情况61-62
• 致谢62-64
• 个人简历64

【参考文献】

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本文编号：1003606