GABA_BR在细胞膜上的运动机制研究

发布时间：2017-10-12 12:32

  本文关键词：GABA_BR在细胞膜上的运动机制研究

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【摘要】：γ－氨基丁酸B受体(gamma aminobutyric acid receptor type B，GABABR)属于C族G蛋白偶联受体，其配体是中枢神经系统中重要的抑制性神经递质γ－氨基丁酸（GABA）。GABABR通过GABAB1和GABAB2两个亚基形成的异源二聚体行使功能。该受体广泛分布于哺乳动物的中枢神经系统与外周神经系统中，能够介导长时程突触抑制。 前期研究表明，GABABR在静息状态下定位在脂筏中，GABAB2亚基C末端上的棕榈酰化修饰在其中发挥重要作用；GABABR激活后转运出脂筏。受体在脂筏内外的定位对其信号转导效率有重要影响。那么GABABR的棕榈酰化修饰是否受受体活性状态的动态调控，棕榈酰化修饰能否通过与其他翻译后修饰机制的相互作用影响出脂筏后受体的命运，迄今为止还没有相关研究。 本文以过表达的HEK293细胞和原代培养的小鼠小脑颗粒神经元细胞作为模式细胞，，通过酰基生物素交换（ABE）实验发现，细胞在静息状态下，GABAB2亚基可发生棕榈酰修饰可促使GABABR定位在脂筏中，当GABABR被激活后，GABAB2亚基的棕榈酰修饰水平显著降低使受体移出脂筏。将GABAB2亚基C末端的Cys874位点突变成Ala可明显降低受体的棕榈酰修饰水平，提示该位点为棕榈酰修饰位点并且能够促进GABABR定位在脂筏中。进一步通过序列分析和免疫荧光结果表明，在GABAB2亚基C末端上与棕榈酰化修饰位点Cys874相邻的830-831-832-833（YQEL）序列是网格蛋白接头因子AP2的识别位点，将该序列全部突变成Ala后，可显著性的抑制受体的组成性内化。最后通过GABAB1a和GABAB2亚基C-末端纯化蛋白的体外结合实验表明，GABAB2亚基的YQEL序列可与Src相互作用，提示Src可能通过磷酸化该序列中的Tyr残基调节GABABR的组成性内化，以上结果为研究GABABR在细胞膜上的运动机制提供了新依据。
【关键词】：GABABR 脂筏 内化 AP2 NMDA 棕榈酰化修饰
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R3411
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-8
• 1 绪论8-24
• 1.1 棕榈酰化调控蛋白质转运研究8-12
• 1.2 GABABR 内化的研究12-18
• 1.3 GABABR 的侧向运动与棕榈酰化18-20
• 1.4 本课题研究内容、目的及意义20-24
• 2 实验技术原理24-27
• 2.1 小脑颗粒细胞神经元的培养24
• 2.2 电穿孔转染技术（Electroporation）24
• 2.3 酰基-生物素交换法（Acyl-biotinyl Exchange， ABE）24-25
• 2.4 GST-Pulldown glutathione S-transferase pulldown25
• 2.5 基于抗原抗体的免疫荧光实验25-26
• 2.6 免疫印迹（Western Blotting）26-27
• 3 实验材料与方法27-36
• 3.1 实验材料27
• 3.2 实验方法27-36
• 4 实验结果与讨论36-48
• 4.1 实验结果36-44
• 4.2 讨论与展望44-48
• 致谢48-49
• 参考文献49-54

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本文编号：1018746