蛋白酶激活受体2在人中性粒细胞弹性蛋白酶诱发气道黏液速发式分泌中的作用及机制

发布时间：2017-10-13 18:16

  本文关键词：蛋白酶激活受体2在人中性粒细胞弹性蛋白酶诱发气道黏液速发式分泌中的作用及机制

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【摘要】：目的研究蛋白酶激活受体2(protease-activated receptor 2,PAR2)在人中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase,NE)诱发气道黏蛋白(mucin,MUC)5AC速发式分泌中的作用及机制。方法用Western blot法检测对照组及NE刺激组Calu-3细胞中PARs的表达。NE分别干预野生型(空白对照组)及转染PARs siRNA的Calu-3细胞,通过ELISA法检测其上清液中MUC5AC的表达,采用Fluo-3AM荧光探针法检测细胞内Ca2+浓度、Western blot法检测胞膜及胞质中蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)水平。NE分别刺激空白对照组、转染PAR2siRNA组、细胞内钙离子螯合剂BAPTA-AM预处理组及PKC抑制剂Chelerythrine预处理组,再通过ELISA法检测其上清液中MUC5AC浓度、细胞免疫荧光法测定细胞质内滞留的MUC5AC。结果 Calu-3细胞系中PAR1、PAR2、PAR3蛋白均呈阳性表达,其中以PAR2为主,而PAR4则呈近似阴性表达。NE刺激Calu-3细胞,其PAR1、PAR3表达较空白对照组无明显变化(P0.05),而PAR2则较空白对照组明显增加(P0.05)。NE刺激野生型Calu-3细胞,其上清液中MUC5AC分泌量及细胞内Ca2+浓度较刺激前明显增加(均P0.05);而转染PAR2siRNA组,其MUC5AC分泌量增加不明显(P0.05),细胞内Ca2+浓度升高水平也不及空白对照组(P0.05)。同时,空白对照组PKC主要存在于胞质中,当给予NE刺激以后,PKC被引导至胞膜。转染PAR2siRNA,细胞内Ca2+螯合剂BAPTA-AM及PKC选择性抑制剂Chelerythrine预处理,均可部分削弱NE刺激后细胞上清液中MUC5AC水平的升高(均P0.05)。结论 NE刺激可导致Calu-3细胞PAR2表达上调,并通过激活PAR2、增加细胞内Ca2+浓度、PKC激活及膜移位导致MUC5AC的速发式分泌。
【作者单位】： 重庆医科大学附属第一医院呼吸内科;
【关键词】： 中性粒细胞弹性蛋白酶 蛋白酶激活受体 信号通路 黏蛋白AC
【基金】：国家临床重点专科专项经费资助项目(卫办医政函[2012]949号)
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 临床工作中我们发现,慢性阻塞性肺病(COPD)急性加重期及哮喘重度发作尤其是致死性哮喘发作的患者,其气道内大量中性粒细胞募集,气道黏液常呈“速发式”分泌。最终导致气道阻塞、气流受限,患者病死率显著增加。因而对这种病态的气道黏液分泌机制的研究成为临床研究的重点,而黏

【参考文献】

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【共引文献】

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【二级参考文献】

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本文编号：1026365