外源性GM3对Ox-LDL诱导的内皮细胞功能与结构的影响

发布时间：2017-10-13 23:26

  本文关键词：外源性GM3对Ox-LDL诱导的内皮细胞功能与结构的影响

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【摘要】：神经节苷脂GM3(ganglioside GM3)是含单个唾液酸的简单的神经节苷脂,在正常的人体细胞膜上发挥着重要的作用。近年来研究发现,多种肿瘤和2型糖尿病的病人血清中GM3的浓度很高,此外,众多证据表明,动脉硬化斑块中GM3的含量也显著升高,这种高浓度的GM3对血管内皮层细胞的结构和功能会产生什么样的影响呢?目前尚不清楚。血管内皮细胞层的完整性和渗透性等生理功能在动脉粥样硬化过程中起着重要作用。而血管内皮细胞的死亡以及新生内皮细胞的贴壁、铺展和迁移能力对维持血管内皮细胞的完整性和渗透性发挥重要作用。本课题首先从外源性的GM3对正常血管内皮细胞功能的影响出发,探究高GM3含量的微环境对动脉粥样硬化形成和发展的影响；并进一步用胆固醇剔除剂来破坏膜“脂筏”结构来探讨GM3对内皮细胞产生影响的可能机制。 实验结果显示,外源性GM3能显著地杀死正常内皮细胞、抑制细胞铺展能力、提高其迁移能力,说明高GM3微环境可破坏正常血管内皮层的完整性；同以往研究报道结果一致,Ox-LDL能够破坏内皮细胞层的完整性,而外源性GM3能够加强Ox-LDL对内皮细胞的作用,表明血管内膜中的高GM3含量会促进动脉粥样硬化的形成和发展。结果显示,用一定浓度的MβCD处理细胞后,能逆转GM3对正常或Ox-LDL诱导的内皮细胞的影响,从而初步解释了GM3的影响机制。
【关键词】：神经节苷脂GM3 血管内皮细胞 β-环糊精 细胞死亡 细胞铺展 细胞迁移
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-8
• 第1章 引言8-18
• 1.1 概述8-9
• 1.2 神经节苷脂的结构和功能9-12
• 1.2.1 神经节苷脂的结构9-10
• 1.2.2 神经节苷脂的功能10-12
• 1.2.2.1 GM3对正常的血管内皮细胞的作用研究11
• 1.2.2.2 GM3在病理学中的作用与研究11-12
• 1.3 低密度脂蛋白的结构与功能的研究12-14
• 1.3.1 低密度脂蛋白的结构12
• 1.3.2 低密度脂蛋白的功能12
• 1.3.3 低密度脂蛋白在氧化后的生物学特性的改变12-13
• 1.3.4 正常人体内氧化型低密度脂蛋白的水平13
• 1.3.5 患者体内氧化型低密度脂蛋白的水平13-14
• 1.3.6 氧化型低密度脂蛋白对正常的血管内皮细胞功能的影响14
• 1.4 动脉粥样硬化的形成过程与原因14-15
• 1.4.1 动脉粥样硬化形成过程14
• 1.4.2 动脉粥样硬化的原因14-15
• 1.4.3 Ox-LDL在动脉粥样硬化形成过程中的作用15
• 1.4.4 GM3在动脉粥样硬化形成过程中的作用15
• 1.5 人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的生物学意义15-16
• 1.6 细胞铺展的生物学意义16
• 1.7 细胞迁移在维持血管内皮层完整性中的生理学意义16-17
• 1.8 展望17-18
• 第2章 外源性GM3对正常的内皮细胞结构与功能的影响18-34
• 2.1 材料与试剂18
• 2.1.1 材料18
• 2.1.2 主要试剂与仪器18
• 2.1.3 培养基的配制与试验试剂18
• 2.1.3.1 培养基的配制18
• 2.1.3.2 主要试剂的配制18
• 2.2 实验方法18-23
• 2.2.1 细胞复苏19
• 2.2.2 细胞的培养与传代19
• 2.2.3 细胞冻存19
• 2.2.4 不同浓度的神经节苷脂GM3对脐静脉内皮细胞的增殖的影响19-20
• 2.2.5 神经节苷脂GM3对细胞铺展的影响20-21
• 2.2.5.1 不同的浓度GM3对细胞铺展的影响20
• 2.2.5.2 GM3在不同时间段和不同浓度血清下对HUVEC铺展的影响20-21
• 2.2.5.3 低温条件下GM3对细胞铺展的影响21
• 2.2.6 不同浓度的GM3对细胞迁移的影响21-22
• 2.2.7 mβCD破坏细胞膜上脂筏后神经节苷脂GM1的荧光分布情况22
• 2.2.8 脂筏破坏后逆转了GM3对细胞增殖的影响22-23
• 2.2.9 脂筏破坏后逆转了GM3对细胞铺展的影响23
• 2.3 结果23-32
• 2.3.1 不同的浓度GM3对细胞增殖的影响23-24
• 2.3.2 不同的浓度GM3对细胞铺展的影响24-25
• 2.3.3 GM3对不同时间段和不同血清浓度的培养液中的细胞铺展的影响25-28
• 2.3.4 低温处理的GM3对细胞铺展的影响28
• 2.3.5 GM3对人脐静脉内皮细胞迁移的影响28-29
• 2.3.6 mβCD破坏细胞膜上脂筏后神经节苷脂GM1的荧光分布情况29-30
• 2.3.7 脂筏破坏后逆转了GM3对细胞增殖的影响30-31
• 2.3.8 脂筏破坏后逆转了GM3对细胞铺展的影响31-32
• 2.4 讨论32
• 2.5 小结32-34
• 第3章 GM3对Ox-LDL诱导的内皮细胞的结构与功能的影响34-44
• 3.1 材料与试剂34
• 3.1.1 材料34
• 3.1.2 主要试剂与仪器设备34
• 3.1.3 相关试剂与培养基配制34
• 3.2 试验方法34-39
• 3.2.1 氧化型低密度脂蛋白的制备34-35
• 3.2.2 TBA法鉴定氧化型低密度脂蛋白35-36
• 3.2.3 BCA法测蛋白浓度36-37
• 3.2.4 mβCD破坏脂筏后摄取Ox-LDL对内皮细胞增殖的影响37
• 3.2.5 mβCD破坏脂筏后摄取Ox-LDL对内皮细胞铺展的影响37-38
• 3.2.6 mβCD剔除外源性的GM3后吞噬Ox-LDL对HUVEC增殖的影响38
• 3.2.7 mβCD剔除外源性的GM3后吞噬Ox-LDL对HUVEC铺展的影响38-39
• 3.3 结果39-42
• 3.3.1 TBA法鉴定氧化型低密度脂蛋白39
• 3.3.2 BCA法测量蛋白浓度39-40
• 3.3.3 mβCD破坏脂筏后摄取Ox-LDL对内皮细胞增殖的影响40
• 3.3.4 mβCD破坏脂筏后摄取Ox-LDL对内皮细胞铺展的影响40-41
• 3.3.5 mβCD剔除外源性的GM3后吞噬Ox-LDL对HUVEC增殖的影响41
• 3.3.6 mβCD剔除外源性的GM3后吞噬Ox-LDL对HUVEC铺展的影响41-42
• 3.4 讨论42-43
• 3.5 小结43-44
• 第4章 讨论与建议44-46
• 4.1 讨论44-45
• 4.2 建议45-46
• 致谢46-47
• 参考文献47-51
• 附录A1 试剂51-52
• 附录A2 仪器设备52-53
• 攻读学位期间的研究成果53

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 杨涌,徐颂立,刘建涛,魏重琴;神经节苷脂GM_3对小鼠巨噬细胞脂质含量的影响[J];郑州大学学报(医学版);2002年03期

2 朱志荣,张伟,郭秀珍;脂蛋白(a)和氧化修饰低密度脂蛋白与冠心病关系的探讨[J];临床内科杂志;1998年01期

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本文编号：1027674