Notch1信号通路在H9c2心肌细胞缺血后处理中对细胞凋亡作用的实验研究

发布时间：2017-10-16 03:49

  本文关键词：Notch1信号通路在H9c2心肌细胞缺血后处理中对细胞凋亡作用的实验研究

  更多相关文章： Notch信号通路 缺血后处理 心肌保护 细胞凋亡

【摘要】：目的： 探讨Notch1信号通路在H9c2心肌细胞缺血后处理心肌保护中对细胞凋亡的影响，为防治心肌缺血再灌注损伤提供新靶点。 方法： 采用大鼠H9c2心肌细胞构建缺氧复氧模型（H/R）和缺氧后处理模型（H-post），脂质体法转染pcDNA3.1-Myc-His质粒和pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miRNA干扰质粒，上调和下调Notch1信号，将H9c2心肌细胞随机分为6组：Control组，H/R组，N1ICD+H/R组，H-post组，miRNA+H-post组，Mock组。采用流式细胞技术检测各组细胞凋亡率，real-time PCR和Western-blotting检测凋亡基因蛋白Bcl-2和Bax表达变化情况，caspase活性检测试剂盒检测caspase-9活性和caspase-3活性。探讨Notch1信号通路在心肌缺氧后处理心肌保护中对大鼠心肌细胞凋亡的影响。 结果： 1.流式细胞术检测细胞凋亡率测定：与Control组相比，H/R组细胞凋亡率显著升高（6.21±0.98%和0.8±0.12%），两者有显著统计学差异（P0.05）；当N1ICD质粒转染上调Notch1信号表达后，N1ICD+H/R组与H/R组相比细胞凋亡率明显下降（3.10±0.17%和6.21±0.98%），两者有显著统计学差异（P0.05）；H-post组细胞凋亡率与H/R组相比下降明显（1.98±0.18%和6.21±0.98%），有显著统计学差异（P0.05）；miRNA干扰下调Notch1信号表达后，miRNA+H-post组与H-post组相比，细胞凋亡率明显增高（6.30±0.26%和1.98±0.18%），有显著统计学差异（P0.01)。 2.凋亡基因蛋白Bcl-2和Bax的表达情况：real-time PCR检测凋亡基因Bcl-2mRNA和Bax mRNA表达水平：H/R组与Control组相比，Bax mRNA表达显著增加(P 0.05)，Bcl-2mRNA表达显著降低(P0.05)；H-post组与H/R组相比Bax mRNA表达水平显著降低(P0.05)，Bcl-2mRNA显著增加(P0.05)；miRNA+H-post组与H-post组相比，Bax mRNA明显高，而Bcl-2mRNA明显降低(P0.01)；N1ICD+H/R组与H/R组相比Bax mRNA表达水平显著降低(P0.05)，Bcl-2mRNA显著增加(P0.05)。通过Western-blotting检测其蛋白表达情况，蛋白表达与相应mRNA表达相一致。 3.Caspase活性检测结果：与Control组相比，H/R组caspase-9和caspase-3活性明显增高(P0.05),通过N1ICD质粒转染,上调Notch1信号表达，N1ICD+H/R组与H/R组相比，，N1ICD+H/R组caspase-9和caspase-3活性显著降低(P0.05)，H-post组与H/R组相比, H-post组caspase-9和caspase-3活性明显降低(P0.05)，通过miRNA干扰下调Notch1信号表达，miRNA+H-post组与H-post组相比，miRNA+H-post组caspase-9和caspase-3活性明显增高(P0.05)。 结论： Notch1信号通路可通过抑制细胞凋亡线粒体途径，减轻细胞凋亡的发生，在心肌缺氧后处理中起到心肌保护作用。
【关键词】：Notch信号通路 缺血后处理 心肌保护 细胞凋亡
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R363
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 第1章 引言10-13
• 第2章 材料与方法13-27
• 2.1 细胞株13
• 2.2 pcDNA3.1-Myc-His 质粒和 pcDNATM 6.2-GW/EmGFP-miRNA 质粒13
• 2.2.1 Notch1 胞内结构域真核表达质粒13
• 2.2.2 Notch1 miRNA 干扰质粒13
• 2.3 实验试剂13-18
• 2.3.1 主要购买试剂13-14
• 2.3.2 主要配置试剂14-18
• 2.4 实验仪器18-19
• 2.5 方法19-20
• 2.6 大鼠心肌细胞 H/R 和 H-post 模型的制备20
• 2.7 细胞转染20-21
• 2.8 实验分组21-22
• 2.9 流式细胞技术检测心肌细胞凋亡22-23
• 2.10 real-time PCR 检测凋亡基因 Bcl-2 mRNA 和 Bax mRNA 表达变化23-25
• 2.10.1 引物设计23
• 2.10.2 H9c2 心肌细胞总 RNA 提取23-24
• 2.10.3 H9c2 心肌细胞总 RNA 逆转录为 cDNA24
• 2.10.4 real-time PCR 检测 Bcl-2 mRNA 和 Bax mRNA 表达变化24-25
• 2.11 Western-blotting 技术检测凋亡基因蛋白 Bcl-2 和 Bax 表达变化25-26
• 2.12 caspase 蛋白活性测定26
• 2.13 统计学分析26-27
• 第3章 实验结果27-32
• 3.1 细胞转染后荧光显微镜下观察27
• 3.2 流式细胞术检测细胞凋亡27-28
• 3.3 凋亡基因 Bcl-2 mRNA 和 Bax mRNA 表达结果变化28-29
• 3.4 Bcl-2 和 Bax 凋亡蛋白表达结果变化29-30
• 3.5 caspase-9 和 caspase-3 活性表达变化30-32
• 第4章 讨论32-37
• 4.1 缺血后处理在心肌缺血再灌注损伤中的心肌保护机制32-33
• 4.2 细胞凋亡在心肌缺血再灌注损伤的作用33-34
• 4.3 Notch 1 信号通过抗凋亡途径在心肌缺血后处理心肌保护的探讨34-35
• 4.4 本课题研究的局限性35-36
• 4.5 展望36-37
• 第5章 结论37-38
• 致谢38-39
• 参考文献39-43
• 附图43-45
• 攻读学位期间的研究成果45-46
• 综述46-53
• 参考文献51-53

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 王晓霞;吴少玲;赵新东;刘相萍;常灿;;Notch1蛋白在淋巴瘤组织的表达及意义[J];齐鲁医学杂志;2013年01期

2 裘明哲;浦佩玉;康春生;张志勇;王广秀;贾志凡;江荣才;;靶向表皮生长因子受体的小分子RNA干扰抑制人脑胶质瘤Notch1表达的实验研究[J];中国现代神经疾病杂志;2006年03期

3 孙德重;祝小林;文卫平;李健;侯伟坚;;β-连环素及Notch1蛋白质在鼻内翻性乳头状瘤中的表达及意义[J];中国耳鼻咽喉头颈外科;2009年11期

4 付文波;黎明;柯琴梅;李大主;何少林;王妍;郭饶;;氧化型低密度脂蛋白对巨噬细胞Notch1表达的影响[J];临床心血管病杂志;2011年08期

5 邓刚;余建华;胡志全;叶章群;;姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞Notch1表达和分布的影响[J];华中科技大学学报(医学版);2007年06期

6 黄红杰;平飞云;胡济安;赵士芳;;过表达外源性Notch1对舌鳞癌细胞体外生长及表皮生长因子受体表达的影响[J];华西口腔医学杂志;2010年01期

7 祝仰廷;李刚;顾涛;仇鞠辉;李宁;郭宗远;韩骅;;精索静脉曲张患者睾丸组织Notch1基因表达分析[J];滨州医学院学报;2010年05期

8 周小建;王卫平;杨毅;;Notch1信号途径在视黄酸对胸腺细胞分化发育中的作用的初步研究[J];营养健康新观察;2004年03期

9 付文波;李大主;丁世芳;何少林;王妍;黎明;冯义柏;;氧化型低密度脂蛋白对人THP1细胞Notch1表达及分泌细胞因子的影响[J];第二军医大学学报;2012年02期

10 杨东虹;唐文渊;徐伦山;肖华亮;周椿;许民辉;;Notch1胞内结构域在星形细胞肿瘤中的表达及其临床意义[J];第三军医大学学报;2010年20期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 王季石;吴颖亚;梅丽娜;胡晓彦;杨远;;Notch1信号系统对再生障碍性贫血和慢性粒细胞白血病病人骨髓造血干细胞分化和增殖的调节研究[A];第11次中国实验血液学会议论文汇编[C];2007年

2 周敏;郭雪君;;Notch1在支气管哮喘发生中的作用[A];中华医学会第七次全国呼吸病学术会议暨学习班论文汇编[C];2006年

3 周小建;王卫平;杨毅;;Notch1信号途径在视黄酸对胸腺细胞分化发育中的作用的初步研究[A];营养健康新观察（第二十四期）：营养与免疫专题[C];2004年

4 齐润姿;安华章;于益芝;张明徽;刘书逊;徐红梅;曹雪涛;;Notch1和TRAIL对肝癌细胞凋亡的影响及作用机制的研究[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年

5 隋毓秀;张志s

本文编号：1040462