沉默PPARγ2对BMP9介导的C2C12细胞成骨分化的影响

发布时间：2017-10-29 09:02

  本文关键词：沉默PPARγ2对BMP9介导的C2C12细胞成骨分化的影响

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【摘要】：实验目的: 研究沉默PPARγ2在BMP9介导的C2C12细胞成骨分化的影响及可能机制。 实验方法： 采用化学发光测定法、组织化学染色、PCR、Western blotting、萤光素酶报告质粒等技术，，研究沉默PPARγ2在BMP9诱导的小鼠C2C12细胞成骨分化的影响。具体方法如下： 1．检测单独及联合使用AdSimPPARγ2、AdBMP9后，C2C12细胞早期成骨指标碱性磷酸酶（alkaline phosphatase, ALP）的活性变化。 2．从基因表达水平和蛋白质表达水平检测单独及联合使用AdSimPPARγ2和/或BMP9后,C2C12细胞早期成骨指标的表达情况 3．检测AdSimPPARγ2和/或AdBMP9对C2C12细胞成脂分化转录因子C/EBP的影响。 4．检测单独及联合使用AdSimPPARγ2和/或BMP9后，晚期骨钙蛋白（OCN）的表达及矿化基质沉积的变化。 5．利用报告质粒及Western blotting，检测使用AdSimPPARγ2和/或BMP9对BMPR-Smad信号通路转录活性的影响。 6．利用Western blot，检测使用AdSimPPARγ2和/或BMP9对PTEN信号通路转录活性的影响。 7.利用RT-PCR，检测使用AdSimPPARγ2和/或BMP9对IGF1细胞因子的影响，利用条件培养基，过表达IGF1，比较IGF1与AdSimPPARγ2对细胞碱性磷酸酶活性的影响。 实验结果: 1．AdSimPPARγ2和AdBMP9联合应用增强早期C2C12细胞ALP活性。 2．AdSimPPARγ2和AdBMP9联合应用增加AdBMP9诱导的C2C12细胞早期成骨转录因子的表达。 3．AdSimPPARγ2和BMP9联合应用能抑制AdBMP9诱导的C2C12细胞成脂分化因子C/EBP的表达。 4． AdSimPPARγ2和AdBMP9联合应用抑制AdBMP9诱导的晚期骨钙素的表达并减弱C2C12细胞矿化基质沉积。 5． AdSimPPARγ2和AdBMP9联合应用仅能在早期激活BMPR-Smad信号通路。 6．AdSimPPARγ2和AdBMP9联合应用能抑制AdBMP9诱导的PTEN信号通路。 7. AdSimPPARγ2促进AdBMP9诱导的C2C12细胞早期成骨中IGF1基因表达，从而增强早期成骨分化。 实验结论： 沉默PPARγ2能明显增强BMP9诱导的C2C12细胞的早期成骨分化，但抑制了晚期的成骨分化。早期的增强作用可能与增强BMPR-Smad信号转录活性、抑制PTEN信号转录活性及上调IGF1细胞因子的表达的有关，而晚期的抑制可能与BMPR-Smad信号转录活性逐渐减弱有关，晚期成骨受抑制的具体机制有待进一步研究。
【关键词】：沉默PPARγ2 C2C12细胞 成骨分化 BMP9 成脂分化
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-7
• 摘要7-10
• ABSTRACT10-13
• 前言13-15
• 第一部分:沉默 PPARγ2 对 BMP9 诱导的 C2C12 细胞成骨分化及相关信号分子的影响15-28
• 1 实验材料和方法15-22
• 2 实验结果22-27
• 3 实验结论27-28
• 第二部分: 沉默 PPARγ2 促进 BMP9 介导的 C2C12 细胞成骨分化机制的初步研究28-36
• 1 实验材料和方法28-30
• 2 实验结果30-35
• 3 实验结论35-36
• 讨论36-39
• 参考文献39-43
• 文献综述43-52
• 参考文献47-52
• 致谢52-53
• 攻读硕士期间在国内外杂志发表文章情况53-54

【共引文献】

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本文编号：1112273