猪细胞周期蛋白依赖性激酶2多克隆抗体的制备与鉴定

发布时间：2017-11-09 15:03

  本文关键词：猪细胞周期蛋白依赖性激酶2多克隆抗体的制备与鉴定

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【摘要】：为研究猪细胞周期蛋白依赖性激酶2(pCDK2)的生物学功能,本试验构建重组原核表达载体pET28apCdk2,转化大肠杆菌BL21(DE3)受体菌,用IPTG诱导重组蛋白(rpCDK2)表达并进行SDS-PAGE和Western blotting鉴定,蛋白经纯化及与弗氏佐剂乳化后免疫家兔制备多克隆抗体。分别用Western blotting和免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)检测抗体的免疫活性。结果显示,成功表达了rpCDK2蛋白,该蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在,可溶性rpCDK2蛋白分子质量约为38ku,包涵体rpCDK2蛋白在38~43ku间有3种不同分子质量形式;IPMA检测结果显示,所制备的pCDK2蛋白多克隆抗体与猪肾细胞(PK-15)和猪睾丸细胞(ST)免疫染色呈特异性反应,且Western blotting分析显示,多克隆抗体与这两种细胞的总蛋白反应出现4条特异性条带(分子质量在34~50ku之间),可能跟pCDK2的多种磷酸化形式有关。本试验利用原核表达系统成功制备了rpCDK2蛋白,并制备了免疫活性和特异性良好的pCDK2蛋白多克隆抗体,为该蛋白生物学功能及相关疾病研究提供了基础材料。
【作者单位】： 南阳师范学院南阳市兽医生物工程技术研究中心河南省伏牛山昆虫生物学重点实验室昆虫生物反应器河南省工程实验室;
【基金】：国家自然基金青年基金(31101837) 河南省重点科技攻关项目(142102110101) 南阳师范学院引进人才专项项目(70640)
【分类号】：R392
【正文快照】： 细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin dependentkinases,CDKs)是一类在细胞周期调控中起重要作用的蛋白激酶,常与周期蛋白以复合物(Cyclin/CDKs)的形式发挥调控作用。其中,CDK2与Cyc-lin E和Cyclin A相互作用,在细胞周期调控、细胞DNA合成和修复过程中扮演着关键角色[1-2]。研究结

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本文编号：1162357