非结核分枝杆菌的菌种鉴定、药敏试验和耐药机制的研究

发布时间：2017-12-15 06:00

  本文关键词：非结核分枝杆菌的菌种鉴定、药敏试验和耐药机制的研究

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【摘要】：研究目的：对非结核分枝杆菌（Non-tuberculosis mycobacteria，NTM）临床分离株进行菌种鉴定；了解不同抗生素对NTM不同菌种的体外抑菌活性；研究脓肿分枝杆菌对克拉霉素的耐药机制。 研究方法：1、非结核分枝杆菌的菌种鉴定：通过16S rRNA的引物将278株NTM临床分离株的DNA进行聚合酶链反应（Polymerase chain reaction，PCR），并将菌株的16S rRNA基因片段进行测序，在基本局部比对搜索工具（Basic LocalAlignment Search Tool，BLAST）比对，进行菌种鉴定；通过rpoB和hsp65的引物将70株脓肿分枝杆菌临床分离株的DNA进行PCR，并将菌株的rpoB和hsp65基因片段进行测序，在BLAST上进行比对，，从而将脓肿分枝杆菌分为不同亚种。2、非结核分枝杆菌的药敏试验：使用ALamar蓝微孔板二倍稀释法(MicroplateAlamar Blue Assay, MABA)对所有NTM临床株进行包括阿米卡星、头孢西丁、克拉霉素、阿奇霉素、亚胺培南、莫西沙星、左氧氟沙星、利奈唑胺、利福平、乙胺丁醇和替加环素在内的11种药物药敏试验，对实验结果进行包括最小抑菌浓度（Minimum Inhibitory Concentration，MIC）值范围、MIC50、MIC90、敏感比例、中等敏感比例、耐药比例等数据的分析，并将脓肿分枝杆菌的不同亚种-Abscessus亚种和Bolletii亚种进行χ2或Fisher精确概率法检验，了解两亚种间对不同抗生素耐药比例的区别。3、脓肿分枝杆菌对克拉霉素的耐药机制：脓肿分枝杆菌对克拉霉素的耐药与erm(41)基因28位点的碱基进行相关性分析。 研究结果：1、非结核分枝杆菌的菌种鉴定：根据16S rRNA将278株NTM临床株又分为快生长分枝杆菌（Rapidly growing mycobacterium，RGM）和慢生长分枝杆菌（Slowly growing mycobacterium，SGM），其中RGM100株（36%），包括脓肿分枝杆菌（25%）、偶发分枝杆菌（8%）、Fuerth分枝杆菌（2%）和龟分枝杆菌（1%）；SGM178株（64%），包括胞内分枝杆菌（47%）、堪萨斯分枝杆菌（12%）和戈登分枝杆菌（5%）。根据rpoB和hsp65基因片段将脓肿分枝杆菌又分为Abscessus亚种和Bolletii亚种，其中Abscessus亚种45株，Bolletii亚种25株。2、非结核分枝杆菌的药敏试验：对于RGM，除偶发分枝杆菌对头孢西丁耐药，以及Abscessus亚种对克拉霉素耐药，大部分RGM临床株对阿米卡星、阿奇霉素、利奈唑胺、亚胺培南、头孢西丁、克拉霉素和莫西沙星敏感或中度敏感，对左氧氟沙星耐药。对于SGM，大部分胞内分枝杆菌临床株对克拉霉素敏感，对利奈唑胺耐药；大部分堪萨斯分枝杆菌临床株对阿米卡星、利福平和乙胺丁醇敏感。3、脓肿分枝杆菌对克拉霉素的耐药机制：erm(41)测序成功的28株Abscessus亚种中，23株为克拉霉素耐药株，5株为敏感株，耐药株中22株erm(41)的28位点为T，余1株为C，5株敏感株的28位点均为C。 研究结论：1、非结核分枝杆菌的菌种鉴定：使用16S rRNA可将278株NTM再分为7种不同菌种，RGM中脓肿分枝杆菌占RGM的大部分，而龟分枝杆菌和Fuerth分枝杆菌数量较少；SGM中胞内分枝杆菌占大部分，而戈登分枝杆菌数量较少；使用rpoB和hsp65可将脓肿分枝杆菌再分为Abscessus亚种和Bolletii亚种。2、非结核分枝杆菌的药敏试验：阿米卡星、阿奇霉素、利奈唑胺、亚胺培南、头孢西丁、克拉霉素和莫西沙星对大部分RGM有较好的抑菌活性，而左氧氟沙星对大部分RGM抑菌活性较差。克拉霉素对胞内分枝杆菌有较好的抑菌活性，而利奈唑胺的抑菌活性较差；阿米卡星、利福平和乙胺丁醇对堪萨斯分枝杆菌的抑菌活性较好。3、脓肿分枝杆菌对克拉霉素的耐药机制：erm(41)基因的28号位点碱基可能与克拉霉素耐药有相关性。
【学位授予单位】：北京市结核病胸部肿瘤研究所
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R378

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本文编号：1290839