乙型脑炎病毒E蛋白抗原表位的结构分析

发布时间：2017-12-28 06:29

本文关键词：乙型脑炎病毒E蛋白抗原表位的结构分析　出处：《中国农业科学院》2009年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】： 乙型脑炎(Japanese encephalitis, JE )是由黄病毒科黄病毒属成员日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus ,JEV)引起的一种严重危害人畜健康的虫媒病毒性疾病。囊膜糖蛋白E是JEV的主要结构蛋白,在病毒的吸附、融合、血凝、细胞趋向性、病毒毒力和诱导保护性免疫反应中起重要作用。本研究参照SA14-14-2序列,对实验室已鉴定出的6个抗原表位(E1、E11、E19、E33、E39、E49)分别从羧基端(C端)和氨基端(N端)进行逐个氨基酸的缩短,设计一系列短肽和与之对应的寡核苷酸链,退火后插入表达载体pGEX-6p-1,与GST进行融合表达,用JEV阳性血清进行Western blot分析,确定出六个抗原表位的核心序列: E1(~7GNRDFIEG~(14))、E11(~(72)EKRADSS~(89))、E19(~(150)ENHGNYS~(156))、E33(~(259)EGGLHHA~(265))、E39(~(310)FAKNPVD~(316))和E49(~(385)VGRGDK~(390))。其中, E19抗原表位( ~(150)ENHGNYS~(156))完全包含于报道的线性中和表位(~(149)SENHGNYSAQVGASQ~(163)),因此推测E19抗原表位为具有中和活性的表位。黄病毒属(Flavivirus)是黄病毒科(Flaviviridae)的最大家族,分为8个血清学亚群,包括70多种具有血清交叉反应特性的不同病毒,如:流行性乙型脑炎、登革热病毒(Dengue fever virus,DV)、西尼罗病毒(West Nile virus, WNV)和昆津病毒(Kunjin virus,KUNV)。这些病毒均能引起发热、脑炎等相似的临床症状,但目前却没有成熟的鉴别诊断方法。本实验把E1、E10、E11、E19、E33、E39和E49七个抗原表位的核心序列与24条乙型脑炎不同病毒株和12条黄病毒属病毒不同代表株的同源序列用生物信息学软件进行了比较和分析,共设计47条突变短肽,进行GST融合表达后用免疫印迹的方法,初步确定了E1、E10、E19和E33四个抗原表位具有鉴别诊断乙型脑炎病毒与部分其他黄病毒属病毒感染的意义。本研究将为进一步分析E蛋白结构和功能、新型表位肽疫苗的研制以及建立乙型脑炎临床鉴别诊断方法奠定分子生物学基础。
[Abstract]:Japanese encephalitis (Japanese encephalitis JE) is a flavivirus member of Japanese encephalitis virus (Japanese encephalitis, virus, JEV) caused a serious harm to human and animal health arbovirus diseases. Envelope glycoprotein E is the major structural protein of JEV. It plays an important role in viral adsorption, fusion, hemagglutination, cell tropism, virulence and induced protective immunity. This study according to the SA14-14-2 sequence, the laboratory has identified 6 epitopes (E1, E11, E19, E33, E39, E49) respectively from the carboxyl terminal (C terminal) and amino terminal (N terminal) to shorten one by one amino acid, design a series of short peptides and the corresponding oligonucleotides. The expression vector pGEX-6p-1 is inserted after annealing, were fused with the expression of GST, Western blot analysis with JEV positive serum, determine the core sequence of the six epitopes: E1 (~7GNRDFIEG~ (14)), E11 (~ (72) EKRADSS~ (89)), E19 (~ (150) ENHGNYS~ (156)) E33, (~ (259) EGGLHHA~ (265)), E39 (~ (310) FAKNPVD~ (316)) and E49 (~ (385) VGRGDK~ (390)). Among them, the epitope of E19 (~ (150) ENHGNYS~ (156)) is completely contained in the reported linear neutralization epitope (~ (149) SENHGNYSAQVGASQ~ (163)). Therefore, we speculate that E19 epitope is a neutralizing epitope.
【学位授予单位】：中国农业科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R392

【引证文献】