抗流感病毒B单抗杂交瘤细胞cDNA文库的构建及生物信息学分析

发布时间：2018-01-20 11:57

  本文关键词： B型流感病毒 杂交瘤 抗体 cDNA文库 生物信息学 EST　出处：《第三军医大学》2008年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】： 流行性感冒(influenza,简称流感)是由流行性感冒病毒引起的急性呼吸道传染病,是人类面临的主要公共健康问题之一。据统计,流感每年的发病率为10%～30%,其流行病学的特点是:突然暴发,迅速蔓延,播及面广。流感流行具有一定的季节性。我国北方常发生于冬季,而南方多发生在冬夏两季。流感发病率高,人群普遍易感。流感临床症状较重,起病急骤,并发症发生率高,特别是肺炎,可引起死亡,死者大多为年迈体弱和幼年多病或有慢性基础病者。B型流感病毒近年来常造成流感局部区域性暴发。 病毒的感染过程其实就是病毒与宿主或机体相互斗争的过程。杂交瘤细胞是一种“1+12”的特殊细胞,其分泌抗体的基因源于受到免疫原刺激的宿主免疫细胞  B细胞。她的基因组承载着病原体与宿主相互作用的信息,同时由于整合了肿瘤细胞的“长生基因”,使其成活时间明显延长,而且极有可能产生一些基因的突变和重组,并由此产生一些抗体之外的新物质。因此流感病毒B单抗杂交瘤细胞基因组的研究是一个值得探索的课题。如何迅速、高效的从基因组中获取生物学信息,是一个富有挑战性的课题,EST技术就是基于这种认识而发展起来的。 本试验用纯化的Flu B抗原免疫小鼠,拟制备能稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,为研制一种方便、快捷、特异的金标试纸快速诊断方法打下坚实的基础,同时拟构建分泌抗Flu B抗体杂交瘤细胞cDNA文库并测序,获取EST片断,再通过美国国家生物信息中心(National Center Biotechnology Information, NCBI)服务器的UniGene数据库进行BLAST检索,应用sequencher软件对EST序列进行片断重叠群分析,应用生物信息学方法研究杂交瘤基因,为预测和进一步开发杂交瘤细胞的功能提供理论基础。 方法和结果: 1.应用纯化的B型流感病毒抗原免疫BALB/c小鼠,经过5次免疫、细胞融合、融合细胞的亚克隆,获得了3株能稳定分泌抗B型流感病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为:3B2,12G3,5A4。3株杂交瘤细胞株染色体计数检测显示接近亲本细胞染色体数目之和。3株单抗的重链均为IgG1型,轻链为κ链,单抗效价较高、与A型流感病毒和RSV均不发生交叉反应。 2.应用经典cDNA文库构建方法,经过细胞总RNA的提取、mRNA的分离,以带有多聚腺苷酸的mRNA为模板,反转录合成cDNA第一链,第二链,cDNA双链和载体的连接,转入受体菌,构建成杂交瘤细胞的cDNA文库。该文库库容为1.27×106。 3.原始文库中挑选了400个克隆,测序共得到384个序列,测序成功率为96%,将序列编辑后去除载体序列后得到长度在200bp～700bp的有效序列320条。经过BLAST程序对所获得的EST片断进行基因,结果显示有118条序列与数据库中的已知基因有较好的相似性。经过Sequencher 4.8软件将384条EST片断的进行片断重叠群(contig)分析,结果共得到包括71条EST序列在内的25组片断重叠群,占全部EST序列的22.2%,其余249条都属于单拷贝序列。 结论: 1.成功制备抗B型流感病毒杂交瘤细胞株,为金标法快速诊断B型流感病毒感染奠定了基础。 2.抗B型流感病毒杂交瘤细胞cDNA文库的成功构建和部分克隆的测序,对于新基因的克隆和功能研究提供了可用资源,同时对预测和进一步开发杂交瘤细胞的功能提供了良好的物质基础。 3.为建立杂交瘤细胞的资源信息库做了重要的开端工作。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R346

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 唐旭;陈瑞;于辉;金晓航;师建国;黄威权;;豚鼠气单胞菌抗独特型单克隆抗体的制备和初步鉴定[J];细胞与分子免疫学杂志;2006年05期

2 杨正涛;张乃生;史利军;李颖;;克伦特罗单克隆抗体的制备及其初步鉴定[J];中国农学通报;2008年05期

3 张红绪;胡萍;胡庚熙;刘丹丹;邢文会;;抗Der p 2单克隆抗体细胞株的建立与鉴定[J];河南师范大学学报(自然科学版);2008年04期

4 贾建桃;马海智;李小进;马丽菊;陈东方;王秦秦;;分泌抗体的杂交瘤细胞株的制备[J];昆明医学院学报;2009年07期

5 高超;仲维学;郑舒丹;陈礼文;朱一蓓;张学光;;一株识别CD83单克隆抗体的研制及其生物学特性鉴定[J];细胞与分子免疫学杂志;2009年10期

6 徐瑞;;我省建立一株能产生抗人红细胞抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株[J];浙江医学;1983年04期

7 夏恺,曾毅,龚翠红;分泌抗人IgA单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株的建立[J];癌症;1986年02期

8 郑文燕,杜佩英,张米利,戴月兰,邵慧珍,周凤鑫,杨君蕊;分泌抗兔ⅧR:Ag单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立[J];上海第二医科大学学报;1986年03期

9 张权一;潘荆华;李秀芝;张颖超;吴铁南;王诚;王晓薇;李长平;易永林;;抗急性非淋巴细胞白血病M_5型单克隆抗体研究[J];中国生物制品学杂志;1991年04期

10 王建一;阎新文;张苏玲;丁小健;;用杂交瘤细胞免疫电泳法检测肺癌患者血清PA_3抗原的初步研究[J];中国肿瘤临床;1991年06期

相关会议论文 前10条

1 陈宏翔;涂亚庭;林能兴;黄长征;张丽霞;严小枫;;淋球菌MtrC融合蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株建立和特性鉴定[A];中华医学会第十二次全国皮肤性病学术会议论文集[C];2006年

2 张浩;吴晓东;陈静;张守富;单虎;吴延功;王志亮;刘佩兰;朱绍辉;;抗猪附红细胞体单克隆抗体的制备[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会论文集[C];2008年

3 李娜;黄小波;曹三杰;文心田;;猪传染性胃肠炎病毒重组N蛋白单克隆抗体的制备及鉴定[A];中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会论文集[C];2008年

4 马文静;刘成成;张浩;;Bla g7单克隆抗体的制备与鉴定[A];中华医学会2009年全国变态反应学术会议论文汇编[C];2009年

5 伍祥林;郭景元;;分泌抗人B型红细胞单克隆抗体杂交瘤细胞株的研制[A];第五次全国法医学术交流会论文集[C];1996年

6 王雪峰;陈永井;王勤;代群;杨科芳;张学光;;一株鼠抗人BTLA单克隆抗体的研制及其生物学功能的初步研究[A];中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议论文摘要[C];2006年

7 王勤;陈永井;谢芳;王雪峰;张学光;;一株激发型鼠抗人OX40L单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定[A];中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议论文摘要[C];2006年

8 夏兴霞;刘洁;王永山;诸玉梅;欧阳伟;张雪寒;何孔旺;;分泌抗大肠杆菌O157:H7单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会论文集[C];2010年

9 赵正历;王润田;王平;王从印;李铁民;韩志鹏;张征峥;邓郁青;;抗HIV-2 gp36基因工程抗原单克隆抗体的制备、鉴定和初步应用[A];河北省免疫学会第5次会员代表暨学术大会论文摘要集[C];2006年

10 李强;潘长旺;梁韶辉;谭峰;;抗嗜人按蚊中肠单克隆杂交瘤细胞系的建立[A];中国细胞生物学学会医学细胞生物学学术大会论文集[C];2006年

相关重要报纸文章 前10条

1 黄泽殠 凌洁;漫谈流感[N];医药经济报;2001年

2 张献怀;春天远离感冒[N];中国中医药报;2003年

3 陈列欢;美国药物科学家协会发布最新药学报告[N];医药经济报;2003年

4 倪红梅;接种疫苗的另一种选择——“流感喷雾”[N];中国医药报;2003年

5 敏;患流感了，该用何药？[N];医药经济报;2002年

6 张献怀;应辨证治疗感冒[N];大众科技报;2003年

7 ;中国2002～2003年度流行性感冒监测分析[N];中国医药报;2003年

8 本报记者 孙玉春 通讯员 孙骥 黄海洋;翱翔在生物科技蓝天上的雄鹰[N];工人日报;2004年

9 罗学刚;流感疫苗鼻喷剂横空出世[N];医药经济报;2003年

10 记者 生焰明 李玉成;防治内毒血症添“利器”[N];健康报;2002年

相关博士学位论文 前10条

1 李兵;抗流感病毒B单抗杂交瘤细胞cDNA文库的构建及生物信息学分析[D];第三军医大学;2008年

2 王芙艳;流感病毒血凝素基因抗流感病毒感染关键序列解析及嵌合基因疫苗的研究[D];中南大学;2008年

3 杨西川;抗人血管内皮生长因子单链抗体的构建、表达及活性鉴定[D];华西医科大学;1998年

4 孔涛;重金属铜、镉快速免疫检测技术研究[D];吉林大学;2010年

5 杨娟;抗TfR抗体偶联物靶向抗瘤效应及其杂交瘤细胞株轻链基因分析[D];华中科技大学;2011年

6 陈琦;红细胞血型单克隆抗体及基因工程抗体的制备[D];扬州大学;2007年

7 李朴;血清YB-1蛋白定量检测方法的建立及其作为肿瘤标志物的探讨[D];重庆医科大学;2012年

8 江敏;大鼠单克隆抗体的制备、鉴定、基因克隆、抗原分析以及药物偶联物的抗肿瘤作用研究[D];中国协和医科大学;1996年

9 石伟;编码一个新的人活化B淋巴细胞分化抗原5C5的部分cDNA克隆及核苷酸序列的测定[D];中国协和医科大学;1995年

10 陈婷梅;人胱抑素C抗体制备和检测方法建立及其方法学评价[D];重庆医科大学;2007年

相关硕士学位论文 前10条

1 董振杰;猪细小病毒核衣壳蛋白VP2单克隆抗体的制备及双夹心ELISA方法的建立[D];河南农业大学;2006年

2 李红飞;促卵泡素单克隆抗体的制备与鉴定[D];西北农林科技大学;2007年

3 王维;高迁移率族蛋白B1单克隆抗体的制备及其在竞争ELISA中的应用[D];天津医科大学;2007年

4 慕生枝;乙型肝炎病毒PreS1单克隆抗体的制备及特性研究[D];重庆医科大学;2007年

5 李晓丽;消减免疫法制备克伦特罗单克隆抗体及其性质鉴定[D];中国人民解放军军事医学科学院;2009年

6 曹黎黎;稳定分泌抗牛γ-干扰素杂交瘤细胞株的建立与鉴定[D];东北农业大学;2011年

7 孙薇薇;抗培氟沙星单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备及免疫学鉴定[D];西北农林科技大学;2012年

8 王珊;鸭源鸡杆菌抗体消长规律研究及抗脂多糖单抗杂交瘤细胞株的建立[D];河南农业大学;2011年

9 王艳;稳定分泌抗羊种布鲁菌脂多糖单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立[D];河南农业大学;2011年

10 阚兵;抗人肺癌单克隆抗体的制备及其生物特性的研究[D];四川大学;2006年

，

本文编号：1448103