供者来源的凋亡胸腺细胞诱导移植免疫耐受的机制

发布时间：2018-03-30 18:42

本文选题：凋亡胸腺细胞　切入点：树突状细胞　出处：《华中科技大学》2009年硕士论文

【摘要】：已证实凋亡细胞具有免疫调节作用,凋亡小体可以调节同种异体器官移植免疫排斥反应。研究发现凋亡细胞首先被吞噬细胞(巨噬细胞和树突状细胞为主)吞噬,然后通过释放一些免疫抑制细胞因子(如TGF-β、IL-10、MIF等)或通过细胞-细胞接触的方式直接诱导同种反应性T细胞失活来减轻移植物的免疫排斥反应,延长移植物存活。为明确在吞噬细胞吞噬凋亡细胞以及吞噬后诱导免疫耐受中巨噬细胞和DC各自起多大作用,本实验通过检测巨噬细胞和DC的吞噬能力,以及吞噬凋亡细胞后各吞噬细胞免疫调节能力以阐明凋亡细胞诱导移植免疫耐受的细胞学基础。目的:探讨供者来源的凋亡胸腺细胞输注诱导移植免疫耐受机制,为临床防治移植物排斥和自身免疫病提供实验基础。方法:用地塞米松20μM诱导小鼠(BALB/c, H-2~d)胸腺细胞凋亡;在560C水浴1小时获得小鼠(BALB/c, H-2~d)坏死胸腺细胞。分别将活的、坏死的、凋亡的BALB/c小鼠胸腺细胞2×10~7个/只,尾静脉输注到C57BL/6小鼠体内,7天后将BALB/c小鼠的皮肤移植给C57BL/6小鼠,观察各组移植皮肤的存活时间。通过尾静脉分别将经荧光物质PKH67或CFSE标记后活的、坏死的、凋亡的BALB/c小鼠胸腺细胞输注到C57BL/6小鼠体内,在不同时间点处死小鼠,分离脾脏制备单个细胞,用荧光素标记抗体(APC-CD11c,PE-B220,PE-F4/80)与脾细胞孵育,用流式细胞术分析C57BL/6小鼠脾脏内pDC(CD11c~+B220~+)、DC(CD11c~+ B220~-)、巨噬细胞(F4/80~+)对活的、坏死的、凋亡的胸腺细胞的吞噬能力;混合淋巴细胞培养实验观察分别吞噬了同系或同种异基因凋亡胸腺细胞后C57BL/6小鼠的DC和巨噬细胞对BALB/c小鼠BMDC刺激C57BL/6小鼠T细胞增殖(CFSE标记流式细胞术分析法)的免疫调节效应。结果: 1.用Annexin-v/PI染色检测,地塞米松诱导BALB/c小鼠胸腺细胞早期凋亡可达61.9% ;用水浴加热法诱导的坏死基本上PI完全阳性。 2.分别输注供者坏死的、活的或凋亡胸腺细胞对皮肤移植物存活时间的影响:凋亡细胞处理组平均存活时间是15.889±2.088天,活细胞处理组平均存活时间是9.000±1.323天,坏细胞处理组为7.333±1.323天,PBS对照组的平均存活时间是10.111±1.616天。凋亡细胞组皮肤生存时间比其它各组都长(n=9, p0.01),坏细胞组皮肤生存时间短于PBS组(n=9,p0.01)。 3.分析不同时间点C57BL/6小鼠脾脏内吞噬细胞对BALB/c小鼠的凋亡胸腺细胞的吞噬情况:结果表明在输注凋亡胸腺细胞后60min时,DC和巨噬细胞的吞噬效率都是最高,而且在观察所有时间点CD11clow B220- DC(imDC)细胞对凋亡细胞的吞噬效率要明显高于CD11chigh B220- DC (mDC)细胞和CD11c+B220+ DC ( pDC )的细胞; F4/80low M?对凋亡细胞的吞噬效率要比F4/80high M?高。凋亡细胞输注24小时后脾脏内检测不出凋亡细胞存在。C57BL/6小鼠脾脏内吞噬细胞对活的、坏死的和凋亡的BALB/c小鼠的胸腺细胞的吞噬差异情况:在活胸腺细胞尾静脉输注时,脾脏内吞噬细胞的吞噬率都低于凋亡细胞组,可能由于活细胞在体内是不会被吞噬的,只有少量在输注前就已经存在的自然凋亡细胞被吞噬细胞所吞噬;DC对凋亡胸腺细胞的吞噬效率也高于坏死胸腺细胞;F4/80low M?对凋亡细胞的吞噬率为21.3%,对坏死细胞的吞噬率为1.1%,F4/80high M?对凋亡细胞的吞噬率为9.5%,对坏死细胞的吞噬率为12.1%,表现出相反的结果。 4. DC和巨噬细胞吞噬凋亡细胞后,免疫调节能力的差异:通过混合淋巴细胞培养试验,发现吞噬了凋亡细胞的巨噬细胞和DC都能明显抑制同种细胞刺激的T细胞增殖反应,且比没加入调节细胞组和没有吞噬凋亡的巨噬细胞和DC组的抑制能力强;吞噬细胞吞噬了同种异基因凋亡胸腺细胞对增殖的抑制能力比其吞噬同系凋亡细胞后的抑制能力强,说明凋亡细胞在体内吞噬所产生的免疫抑制效应是有抗原特异性的。结论: 1.供着来源的凋亡胸腺细胞可以明显延长皮肤移植物存活时间,而活细胞和坏死胸腺细胞的过继输注却没有这样的效果。 2.活细胞在体内是不能被吞噬的,而坏死细胞的吞噬却能诱发炎症反应,加速皮肤移植物的排斥。在对脾脏内具体细胞的吞噬能力的研究发现,DC中的CD11clow B220+(imDC)的吞噬能力是所有DC亚类中最强的, F4/80low的巨噬细胞对凋亡细胞的吞噬效率高于F4/80high的巨噬细胞,而对坏死细胞的吞噬效率两者却相反。 3.混合淋巴细胞培养表明,吞噬了凋亡细胞的巨噬细胞和DC都能明显抑制同种细胞刺激的T细胞增殖反应。凋亡细胞在体内吞噬所产生的免疫抑制效应是有凋亡细胞抗原特异性的。
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【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R392

【参考文献】