骨髓间充质干细胞的分离培养及组合生长因子对其成软骨分化的一般研究

发布时间：2018-05-21 01:33

  本文选题：骨髓间充质干细胞 + 生长因子　； 参考：《安徽医科大学》2009年硕士论文

【摘要】： 目的分离培养骨髓间充质干细胞(MSCs);并对转化生长因子-β_1(rhTGF-β_1)和胰岛素样生长因子-Ⅰ(rhIGF-Ⅰ)诱导MSCs成软骨分化的能力进行一般研究。 材料与方法新西兰大白兔32只,雄性,月龄4～6月,体重2.5～3.5kg。任选其中一只行双侧髂骨穿刺抽取骨髓,分离骨髓MSCs,并行体外培养,实验分为实验组与对照组。实验组DMEM培养液中加入rhTGF-β_1和rhIGF-Ⅰ,对照组中未加入诱导因子。比较实验组与对照组的细胞增殖情况和成软骨分化情况。制备同种异体脱钙骨基质(DBM)作为支架材料。将体外培养的实验组MSCs(P_3)负载到DBM中,构建组织工程软骨复合体,筋膜包裹后缝合固定到30只兔膝关节腔内行腔内培养。分别于植入后4w、8w、12w各取10只标本进行组织学切片观察及Ⅱ型胶原免疫组织化学观测,并对结果进行分析。 结果实验组中MSCs集落形成效率(20/10~6)明显高于对照组(4/10~6)(u=3.326,P＜0.01)。实验组细胞爬片做Ⅱ型胶原免疫组化检测呈阳性,阳性细胞主要集中在细胞密度高的区域,胞质内可见棕黄色反应物颗粒,对照组未见阳性细胞。制备得到的同种异体DBM为三维立体多孔结构,可塑性好并有适宜的机械强度。复合体在腔内培养12w后,取出行组织学切片观察及Ⅱ型胶原免疫组化观测:HE染色见大量软骨细胞增生,胞核染色呈蓝色;甲苯胺蓝染色见软骨细胞成串排列,大量软骨陷窝形成,周围大量基质包绕;Ⅱ型胶原免疫组织化学反应见细胞外基质中出现大量棕黄色颗粒,Ⅱ型胶原染色强阳性。 结论rhTGF-β_1和rhIGF-Ⅰ可促进MSCs增殖和成软骨分化,MSCs与同种异体DBM结合后可在关节腔内成功培养出组织工程软骨。同种异体DBM符合组织工程软骨支架材料的基本要求,有望成为一种理想的用于关节软骨缺损修复的软骨组织工程支架材料。
[Abstract]:Objective to isolate and culture bone marrow mesenchymal stem cells (MSCs), and to study the ability of transforming growth factor- 尾 1 rhTGF- 尾 1) and insulin-like growth factor- 鈪，

本文编号：1917157