HIF-1α基因在大鼠缺血—再灌注肾组织中表达的意义以及高压氧、丹参酮ⅡA对其表达影响的实验研究

发布时间：2018-11-07 08:42

【摘要】： 目的：通过建立大鼠肾缺血-再灌注损伤(IRI)模型,观察低氧诱导因子-1α(HIF-1α)在缺血-再灌注肾组织中的表达变化,并采用高压氧(HBO)和丹参酮ⅡA(TanⅡA)对肾IRI进行干预,深入研究肾IRI的发生机制以及高压氧和丹参酮ⅡA对肾IRI的影响,为临床应用HBO和TanⅡA防治肾IRI提供理论依据。材料和方法：Wistar大鼠84只,随机分为正常对照组、缺血组、缺血-再灌注组(1h、3h、5h组)、高压氧治疗组(1h、3h、5h组)、丹参酮ⅡA治疗组(1h、3h、5h组)以及假手术组(1h、3h、5h组),每组6只。各组均先切除右肾。正常对照组在切除右肾的同时切取左肾备用,假手术组不阻断左肾动脉,其余各组则建立左肾IRI模型进行研究。之后,分别于相应时点切取左肾,其部分皮髓质经4%多聚甲醛固定后石蜡包埋,切片行HE染色和免疫组化检测HIF-1α蛋白的表达；另一部分则采用实时荧光定量PCR检测HIF-1αmRNA的表达。取肾后经下腔静脉采血,采用全自动生化分析仪和放射免疫法分别检测血中BUN、SCr、MDA和TNF-α的含量。结果：①BUN在假手术组5h、HIF-1α蛋白表达在假手术组3h、HIF-1αmRNA表达在假手术组1h增高与正常对照组比较,差异有显著性(P0.05)。 ②BUN、SCr、MDA、TNF-α均分别按正常对照组、缺血组、缺血-再灌注组(1h、3h、5h组)依次增高,差异有显著性(P0.05)。HIF-1αmRNA的表达按缺血-再灌注组1h、缺血-再灌注组5h、正常对照组、缺血-再灌注组3h、缺血组依次增高,其中缺血-再灌注组5h与正常对照组比较差异无显著性(P0.05),其余各组比较差异有显著性(P0.05)。HIF-1α蛋白的表达在缺血组和缺血-再灌注组均呈高表达,与正常对照组比较,差异有显著性(P0.05)。 ③经高压氧处理后,与缺血-再灌注组比较：血中BUN、SCr、MDA和TNF-α的含量显著降低,HIF-1αmRNA的表达水平增高,差异有显著性(P0.05),而HIF-1α蛋白的表达变化不明显(仍呈高表达),差异无显著性(P0.05)。 ④经丹参酮ⅡA处理后,与缺血-再灌注组比较：血中BUN、SCr、MDA和‘TNF-α的含量以及肾组织HIF-1α蛋白的表达水平均显著降低,而HIF-1αmRNA的表达水平增高,差异有显著性(P0.05)。 ⑤相关性分析：根据肾组织HIF-1αmRNA和HIF-1α蛋白的表达水平和血BUN、SCr、MDA、TNF-α结果行相关分析,发现MDA与BUN(r=0.0.633,P0.01),MDA与SCr (r=0.475,P0.01), TNF-α与BUN(r=0.702, P0.01), TNF-α与SCr(r= 0.706, P0.01), TNF-α与MDA(r= 0.577, P0.01), TNF-α与HIF-1α蛋白的表达水平(r=0.257,P0.037)和BUN与SCr(r=0.514,P=0.000)具有显著的正相关性,而BUN与HIF-1αmRNA的表达水平具有显著的负相关性(r=-0.260,P0.035) ⑥病理结果：与正常对照组比较,假手术组的组织结构变化不明显,缺血组则出现肾间质、肾小球小血管淤血和肾小管上皮细胞水肿。再灌注1h时,肾小管上皮细胞明显水肿,而且肾小球和肾间质充血明显；再灌注3h、5h时,除见充血、水肿外,另见肾小管上皮细胞脂肪变性及细胞内玻璃样变,个别肾小管腔内见蛋白管型。高压氧处理后与缺血-再灌注组比较,仅在5h时见组织充血明显减轻,而1h和3h时组织变化不明显。丹参酮ⅡA处理后,在各时间点仅个别标本中见肾小管上皮细胞水肿、细胞内玻璃样变及脂肪变性、肾间质和肾小球充血以及蛋白管型,总体病变程度较高压氧治疗组和缺血-再灌注组轻。结论：①手术本身的创伤对BUN的含量和HIF-1α的表达有影响。 ②肾缺血-再灌注后,MDA和TNF-α含量增高以及肾组织中HIF-1α蛋白的高表达是加重肾功能损害的重要原因。 ③丹参酮ⅡA对肾组织中HIF-1α蛋白的表达具有明显的抑制作用,这可能是肾缺血-再灌注后丹参酮ⅡA产生肾保护效应的重要机制。而抑制再灌注后氧自由基和TNF-α的产生则是丹参酮ⅡA和高压氧产生肾保护效应的共同通路。 ④高压氧对肾组织中HIF-1α蛋白的表达无明显的抑制作用,表明再灌注后高压氧可能没有通过HIF-1α环节发挥肾保护作用。 ⑤丹参酮ⅡA和高压氧虽然能促进再灌注后肾组织中HIF-1αmRNA的表达,但是丹参酮ⅡA能明显抑制HIF-1α蛋白的表达,说明丹参酮ⅡA对HIF-1α的表达可能具有双向调节作用。
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【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R285.5;R363

【参考文献】