Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白B的表位筛选与鉴定及糖蛋白D的真核表达

发布时间：2018-12-27 19:05

【摘要】： Ⅱ型单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus 2,HSV-2)感染可造成一种常见而古老的性传播疾病——生殖器疱疹,其发病率在性病中仅次于淋病和梅毒。在HSV-2的11种糖蛋白中gD能诱导产生相对较高的中和抗体水平,gB可诱导产生中和抗体并能引起细胞毒性T细胞反应,因此成为亚单位疫苗的首选。 糖蛋白B (glycoprotein B,gB)作为单纯疱疹病毒两个血清亚型的共有外膜蛋白,在维持病毒形态及病毒进入缩主细胞起着非常重要的作用。人及动物接种gB可诱发高水平的中和抗体并可以引起保护性T细胞免疫反应。因此,选取HSV-2 gB全基因序列利用生物学软件对B及HLA-A*0201限制性T细胞表位进行了预测,所筛选的B细胞中和表位能在小鼠体内诱发高水平的抗体,并且以介导Th2型免疫反应的IgG1亚型为主。同时,这两个B细胞中和表位诱发的抗体能特异性中和病毒(感染)。另外,利用免疫学方法检测从gB上筛选的T细胞表位是否能够刺激T2细胞表面稳定地产生HLA-A*0201复合物;筛选的T细胞表位在体内/外是否能够刺激产生有效的IFN-γ及有效的CD8+T细胞的杀伤作用。结果显示,预测的T细胞表位可以刺激T2细胞稳定产生HLA-A*0201复合物,并可以刺激T细胞分泌IFN-γ与CD8+T细胞毒作用。 以HSV-2 333株的基因组DNA为模板扩增编码HSV-2糖蛋白D(glycoprotein D,gD)基因,与载体pFastBacⅠ连接,转化E.coil DH5α感受态细胞,经PCR及测序鉴定正确。将pFastBacⅠ-gD重组质粒转座至DH10Bac获得重组穿梭质粒,转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒。重组杆状病毒感染Sf9细胞表达重组蛋白,经对表达条件进行优化,SDS-PAGE和Western blot鉴定,成功表达了HSV-2 gD蛋白。为下一步的工作奠定了基础。
[Abstract]:Herpes simplex virus type 鈪，

本文编号：2393481