同种异基因骨髓移植后α-GalCer的应用加速免疫重建并未加重αGVHD

发布时间：2019-07-18 07:14

【摘要】： 目的:造血干细胞移植后免疫重建及急性移植物抗宿主病(acutegraft-versus-host disease,aGVHD)的研究为本领域研究的热点。NKT细胞是T淋巴细胞中的一新型的调节型细胞,α-GalCer(α-galactosylceramide,α-半乳糖神经酰胺),能特异性识别并激活NKT细胞,迅速的大量的分泌IFN-γ及IL-4。本研究在小鼠同种异基因骨髓移植模型中探讨移植后受鼠体内α-GalCer的应用是否有促进免疫重建的作用,同时不加重aGVHD,并对其机制进行初步的探讨。方法:1.建立同种异基因清髓性骨髓移植模型。C57BL/6小鼠为供鼠,BALB/c小鼠为受鼠。首先摸索出最小的清髓性辐射剂量,之后以此辐射剂量作为骨髓移植前的预处理,建立两个aGVHD严重程度不同的骨髓移植模型。2.利用aGVHD相对较轻的骨髓移植模型,实验组骨髓移植后立即腹腔注射α-GalCer,对照组骨髓移植后立即腹腔注射溶剂DMSO。移植后同一时间点检测两组小鼠脾脏的单个核细胞计数、CD~(3+)、CD4~+、CD8~+、B220~+、CD40~+、CD86~+、CD11c~+、CD80~+细胞的相对数目;供者细胞嵌合率;胸腺的单个核细胞计数和细胞组份;造血重建。并进行体外造血干细胞集落的培养及体内、外T、B细胞的增殖实验。3.利用aGVHD严重程度不同的两个骨髓移植模型,实验组骨髓移植后立即腹腔注射α-GalCer,对照组骨髓移植后立即腹腔注射溶剂DMSO。在每个移植模型中观察两组小鼠的生存期、aGVHD的临床表现和病理改变、供者细胞嵌合率。并进行移植后6小时血清及移植后d27脾脏单个核细胞培养上清细胞因子的检测;体内、外胸腺、脾脏、外周血、外周淋巴结单个核细胞及T细胞的迁移检测。结果:1.≥7.5Gy TBI为清髓剂量。以7.5Gy TBI为预处理,在输注相同的骨髓细胞数的前提下,输注脾细胞数3×10~7及1×10~7,建立两个aGVHD严重程度不同的同种异基因骨髓移植模型。2.在输注脾细胞数1×10~7骨髓移植模型中,骨髓移植后d70,实验组小鼠脾脏单个核细胞计数、CD3~+、CD4~+、CD8~+、B220~+、CD40~+及CD86~+细胞的比例均明显高于对照组,CD11c~+、CD80~+细胞的比例两组间无区别:胸腺单个核细胞计数、CD3~+、CD4~+、CD8~+细胞的比例两组间无区别,且均较正常小鼠明显偏低。移植后早期d7,实验组供者细胞嵌合率高于对照组。移植后d3,实验组外周血白细胞高于对照组。体外造血干细胞集落培养,α-GalCer组较DMSO组CFU数目明显多。体内、外T、B细胞增殖实验,α-GalCer组较DMSO组T、B细胞明显增殖。3.在aGVHD严重程度不同的两个骨髓移植模型中,实验组小鼠较对照组小鼠生存时间明显延长,aGVHD临床表现及病理改变减轻。4.在输注脾细胞数1×10~7移植模型中,移植后6小时血清中IL-4水平实验组小鼠与腹腔注射α-GalCer的正常小鼠、腹腔注射α-GalCer的单纯照射小鼠无差异,均明显高于腹腔注射DMSO的单纯照射小鼠;血清中IFN-γ水平实验组小鼠与腹腔注射α-GalCer的单纯照射小鼠无差异,稍高于腹腔注射DMSO的单纯照射小鼠,均明显低于腹腔注射α-GalCer的正常小鼠。移植后d27脾脏单个核细胞培养上清中IL-4、IL-10水平实验组高于对照组,而IFN-γ、IL-2水平实验组低于对照组。5.体内、外迁移实验:在α-GalCer的作用下单个核细胞、CD3~+、CD4~+、CD8~+细胞从胸腺、脾脏、外周血中出来,迁移至外周淋巴结。结论:1.BALB/c小鼠接受~(60)Coγ射线TBI的致死剂量是≥7.5Gy。在接受7.5Gy TBI的预处理后,输注相同的骨髓细胞数的前提下,输注不同的脾细胞数建立两个aGVHD严重程度不同的骨髓移植模型,随着输注脾细胞数增加,aGVHD的严重程度随之增加。2.移植后α-GalCer的应用促进T细胞、B细胞的免疫重建,同时增加第二刺激信号CD86、CD40的表达。3.α-GalCer加速的免疫重建与α-GalCer促进供者细胞的早期植入、促进造血干细胞的增殖与分化、促进T、B细胞的增殖作用有关,而与改善胸腺的功能无关。4.移植后α-GalCer的应用减轻了aGVHD,而且并未以延迟植入为代价,同时维持植入的持久。减轻aGVHD的机制之一:α-GalCer使受者的NKT细胞分泌大量的IL-4,促使供者的T细胞向Th2分化;减轻aGVHD的机制之二:α-GalCer促使T淋巴细胞从胸腺、脾脏、外周血出来,迁移至外周淋巴结,减少进入至靶器官的淋巴细胞数量,从而减轻淋巴细胞对靶器官的损伤。
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图片说明： 的三组小鼠死亡前白细胞 <0.5xl护几，60d死亡率为100%，接受 7GyTBI的5只小鼠全部长期存活，生存时间>60d。四组用时序检验，随着照射剂量的增加，生存时间明显缩短，见图1一2。所以7Gy是亚致死剂量，gGy、8.SGy、
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图片说明： 组小鼠均出现活动度减低、翘毛、弓背的表现，，sl组小鼠部分出现头部脱毛、皮肤破溃，但均无腹泻症状。Sl组小鼠BMT后的aGVHD临床评分曲线，见图1一4。0﨑0一的卫日﨏一O;味龚或幕一一翻 7142128354249肠847077DayS卯 5ttr劝SPILantahan图l一4骨髓移植后Sl组小鼠的aGVHD临床评分曲线4骨髓移植后小鼠的aGVHD病理表现Sl组及53组濒死前小鼠的肝脏均表现为:肝细胞浊肿样变性，甚至坏死，汇管上皮细胞的坏死，汇管区及肝实质坏死区周围大量的淋巴细胞的浸润，内皮静脉炎。53组小鼠的肠道病理表现为散在分布的肠上皮细胞的凋亡，
【学位授予单位】：中国人民解放军军医进修学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R392

【共引文献】

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本文编号：2515723