Tat肽段介导的超顺磁性纳米铁颗粒通过体外血脑屏障模型的研究

发布时间：2019-09-10 09:20

【摘要】：目的利用小鼠星形胶质细胞和脑微血管内皮细胞共培养建立稳定的体外血脑屏障模型。 方法1.取昆明小白鼠晚期胎鼠脑皮质,胰酶消化,过滤法培养原代星形胶质细胞,并利用差速培养和恒温摇床去除杂细胞,采用GFAP免疫组化法鉴定;2.取昆明小白鼠3d内新生小鼠的脑皮质,采用II型胶原酶消化,BSA梯度离心,胶原酶/分散酶消化进行微血管内皮细胞原代培养,24h后换全液去除杂细胞。倒置显微镜下观察细胞形态,采用Ⅷ因子相关抗原免疫组化法进行鉴定;3.利用transwell小室将Ⅳ代星形胶质细胞与Ⅱ代脑微血管内皮细胞共培养。通过光镜观察,脑微血管内皮细胞AKP活性测定,及4h试漏实验、辣根过氧化物酶通透性测定来鉴定模型。 结果原代培养小鼠星形胶质细胞传至第四代细胞经GFAP免疫组化鉴定阳性率达95%,脑微血管内皮细胞,传至第二代后通过Ⅷ免疫组化鉴定,阳性率达90%,共培养后的微血管内皮细胞AKP活性与单独培养的微血管内皮细胞的相比有明显的提高。而通过4h试漏实验,及辣根过氧化物酶通透性实验均说明共培养模型的通透性较单层细胞有明显降低。 结论利用来源同一种系小鼠的细胞可以构建稳定的血脑屏障模型,为进一步的开放血脑屏障研究打下基础,也为初步鉴定诊断治疗性药物能否通过血脑屏障提供较好的实验模型。 目的探讨Tat肽段介导的超顺磁性纳米氧化铁颗粒(Tat-MNPs)是否能通过血脑屏障。 方法利用transwell共培养小室体外构建血脑屏障模型,用不同稀释倍数的FITC荧光标记Tat肽段介导的超顺磁性纳米氧化铁颗粒(FITC-Tat-MNPs)加入transwell供池,在不同时间段,利用倒置荧光显微镜观察受池是否有荧光显示,来判断FITC-Tat-MNPs是否能通过血脑屏障模型。 结果加入FITC-Tat-MNPs后4hPET膜上均可见不同程度的绿色荧光,并且与FITC-Tat-MNPs稀释的倍数有相关性,4d后在受池底部的细胞可见绿色荧光。 结论FITC-Tat-MNPs有可能通过血脑屏障模型,并有可能是利用Tat穿透细胞的作用通过,这为利用核磁共振技术早期诊断Alzheimer病提供了基础。
【图文】：

12图1. 星形胶质细胞原代培养第10天 ×100图2、3. 星形胶质细胞GFAP免疫组化鉴定，左为光镜下 ×200，，右为同一视野荧光显微镜下所见 ×200图4、5. 左4脑微血管内皮细胞原代第3天光镜下所见 ×100，右5为原代第7天光镜下所见 ×100

12图1. 星形胶质细胞原代培养第10天 ×100图2、3. 星形胶质细胞GFAP免疫组化鉴定，左为光镜下 ×200，右为同一视野荧光显微镜下所见 ×200图4、5. 左4脑微血管内皮细胞原代第3天光镜下所见 ×100，右5为原代第7天光镜下所见 ×100
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R-332

【共引文献】

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本文编号：2533937