PTD-ΔhNFATminiDBD蛋白在大鼠心脏移植急性排斥模型中的应用研究

发布时间：2019-10-10 16:35

【摘要】： 目的：建立一种简洁、有效的大鼠异位心脏移植模型,作为器官移植的实验研究方案。采用大鼠心脏移植急性排斥反应模型研究带蛋白转导结构域的人NFAT最小DNA结合域(protein transduction domain conjugated human NFAT mini DNA binding domain, PTD-△hNFATminiDBD)体内抗移植排斥反应的功能。方法：以Ono法为基础并在此基础上进行改进。受体手术先进行至准备缝合。供体生理盐水冰块腹部降温至双腋部低温后,胸腔打开以冰生理盐水快速致心跳停止。供心采用直视下缝合。建立Wistar-SD大鼠腹部心脏移植急性排斥模型。增殖含△hNFATminiDBD. PTD-△hNFATminiDBD质粒载体的E·Coli M15菌株,诱导△hNFATminiDBD.PTD-△hNFATminiDBD融合蛋白表达并提取、纯化。Wistar和SD大鼠随机配对进行手术,将手术成功的36只大鼠随机分成四组：生理盐水对照组、△hNFATminiDBD蛋白组、PTD-△hNFATminiDBD蛋白组、环孢素组。各组术后第一天分别予以不同剂量的相应药物腹腔注射,每天一次,共一周。观察移植心脏存活时间并进行统计分析,术后第七天各组中随机取1例供心切片HE染色。结果：成功建立了大鼠心脏移植模型,本项研究采用改良Ono于术方法,共制作大鼠心脏异位移植模型41例,成功37例,成功率为90.2%。建立的Wistar-SD大鼠腹部心脏异位移植模型随机分成四组,各组经药物处理后,其供心存活时间分别为：空白对照组：8.63±0.95d、△hNFATminiDBD蛋白组：9.06±1.32d、PTD-△hNFATminiDBD蛋白组：15.06±0.94d、环孢素组：22.94±1.15d。PTD-△hNFATminiDBD蛋白组大鼠移植心脏的存活时间较空白对照组显著延长(P0.05),但较环孢素组短(P0.05)。各组动物心脏组织经病理切片后观察结果支持统计分析结果。结论：本实验室采用的改良Ono手术方法,能简化手术步骤、提高手术成功率,特别有利于无心脏移植手术或血管手术经验者进行相关研究。PTD-△hNFATminiDBD融合蛋白能显著延长大鼠异位移植心脏的存活时间。
【图文】：

受体,腹部,供体,心脏

受体腹部准备PreParationofree甲ient

供体,心脏

20ml注射器抽取冰生理盐水分别从右肺动脉远端口、下腔静脉切口、主动脉近端口冲洗心腔和冠脉中的积血，至流出液清。然后用4一丝线整体结扎。显微手术剪剪断肺静脉、上下腔静脉，取出心脏(见图2.2)，置入冰生理盐水中，并用冰生理盐水小片纱布包裹。(3)异位心脏移植:lml注射器抽取0.2ml(SOU)肝素生理盐水后再抽取生理盐水至0.5ml，于受体下腔静脉预切开点穿入下腔静脉，缓慢注入以抗凝和补充血容量。干棉球压迫后即于腹主动脉和下腔静脉远近端分别上血管夹，于腹主动脉与供心主动脉端侧吻合点前外侧用lml注射器针头穿孔后，显微手术剪开Zmm左右(稍小于供心主动脉口)，，将供心用冰生理盐水纱布包裹后置于切口左侧，上置生理盐水冰块。用8一0显微无损伤缝合线从腹主动脉切开顶点右侧进针，按顺时针方向将供心主动脉和腹主动脉连续缝合。针距和边距各为o.smm左右。打结前腹腔注入少量生理盐水浸泡吻合口驱除血管内空气。缝合完成后将近端血管夹稍试开放即再夹闭
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R-332;R654.2

【参考文献】