缺血再灌注致结肠动力动态损伤动物模型的研究

发布时间：2019-11-11 09:51

【摘要】：目的： 胃肠的运动功能是消化系统最主要的生理功能之一。临床上将脘腹胀满,恶心,呕吐,暖气,腹泻便秘为主要表现或伴有精神不佳,四肢乏力等症状者归属中医脾胃病范畴。有实验研究表明,缺血再灌注可以导致大鼠精神萎靡、活动欠佳、毛色晦暗、腹部胀满并出现胃肠动力障碍,提示缺血再灌注模型在一定程度上模拟了中医理论中焦壅塞,气机淤滞,脾气下陷,胃气上逆所致的脾胃升降失常的临床表现。本实验分别建立肠系膜上动脉缺血再灌注模型和肢体缺血再灌注动物模型,以不同缺血时间和不同再灌注时间进行分组。通过对大鼠肠黏膜及主要脏器病理形态观察；结肠平滑肌肌条收缩振幅及结肠平滑肌细胞Ca2+-ATP酶活力的检测,比较两种造模方法对结肠动力损伤的动态变化规律,并筛选适合的胃肠动力障碍模型,有助于今后探索临床不同阶段胃肠动力障碍性疾患的最佳给药时间与合理用药,提供实验研究依据。方法： 1、建立肠系膜上动脉缺血再灌注动物模型：利用无创动脉夹夹闭大鼠肠系膜上动脉：统一缺血45min,依据不同再灌注时间分为：再灌注6h组、再灌注24h组、再灌注48h组(C45-6、C45-24、C45-48)；统一再灌注时间48h,依据不同缺血时间进行分为：缺血60min组、缺血75min组(C60-48、C75-48)。 2、建立肢体缺血再灌注动物模型：采用统一300g拉力橡皮筋束缚大鼠双侧大腿腹股沟处,环绕结扎3周,持续缺血3小时后,迅速解除结扎,进行肢体再灌注,按照再灌注时间不同分为：12h组、18h组、24h组(Z3-12、Z3-18、Z3-24)。 3留取小肠、结肠及心脏、肺脏、肾脏,进行HE染色,光镜下观察其病理变化,计数小肠绒毛正常分型的比例,测量小肠黏膜厚度及绒毛高度。 4制备大鼠离体结肠平滑肌肌条,通过对大鼠结肠平滑肌肌条收缩波平均振幅的检测,探讨不同时间点结肠平滑肌收缩波振幅动态变化的规律。 5制备大鼠结肠平滑肌细胞,运用定磷法测定细胞内Ca2+-ATP酶活力,探讨不同缺血再灌注模型结肠平滑肌细胞Ca2+-ATP酶活力的变化。 结果： 1、肠系膜上动脉缺血再灌注模型组：统一缺血45min组,在延长再灌注时间后小肠黏膜病理出现形态改变,但正常绒毛分型比例、黏膜厚度绒毛高度与空白对照组均无差异(P0.05),结肠平滑肌肌条收缩波振幅于再灌注6h、24h呈下降,再灌注48h后上升的趋势,与空白对照组均无统计学差异(P0.05)。统一再灌注48h组,缺血时间由45min延长至60min后,小肠黏膜正常绒毛分型比例、绒毛高度、黏膜厚度均较空白对照组呈有意下降(P0.05),结肠平滑肌肌条收缩振幅下降(P0.05)；延长缺血时间至75min结肠肠壁变薄,肌张力差,不能耐受1g前负荷,无法测量其振幅。模型各组结肠黏膜部分出现轻度病理改变。缺血75min组结肠平滑肌细胞Ca2+-ATP酶活力较空白对照组无统计学差异(P0.05)。 2、肢体缺血再灌注模型各组：小肠粘膜均出现病理形态的改变,正常绒毛分型比例、绒毛高度、绒毛厚度均较空白对照组呈有意下降(P0.05)。随再灌注时间延长各组小肠黏膜病理损伤呈有意下降(P0.05),各组心脏、肺脏、肾脏均出现不同程度的病理损伤。肢体缺血再灌注12h、18h组结肠平滑肌肌条收缩波振幅均低于空白对照组(P0.05,P0.01)；再灌注24h结肠平滑肌变薄,弹性差,不能耐受1g前负荷拉力,无法测量其振幅。模型各组结肠黏膜部分出现了病理改变。肢体缺血再灌注12h组结肠平滑肌细胞Ca2+-ATP酶活力较空白对照组呈升高趋势,再灌注18、24h后则出现逐渐下降趋势,但均维持在正常水平,较空白对照组均无统计学差异(P0.05)。 结论： 两种缺血再灌注模型由于造模方法的不同,存在不同的动态变化规律,均能够造成结肠动力不同程度的损伤,可以作为模拟临床胃肠动力障碍性疾病的动物模型,其中肢体缺血再灌注模型以操作简便、易于统一量化手法为佳。
【图文】：

8]制备缺血再灌注模型，进行肠屏面的研究罕有报道。前人实验证肠动力损伤，但不同缺血再灌注未深入探讨。由于缺血再灌注损故此选择这两种模型作为结肠动鼠结肠平滑肌收缩振幅变化的观科大学总医院制剂室。o小NaHCO3天津精细化工厂。张力换能器

2.2.1肠系膜上动脉缺血再灌注组实验结果结肠动力:如表1、图2所示:相同缺血时间45min不同再灌注时间组:C45一6、C45一24组结肠平滑肌肌条收缩振幅呈下降趋势，C45一48组振幅呈上升趋势，但与N组相比均无统计学意义(P>0.05);C45一6、C45一24两组间振幅差别无统计学意义(P>0.05)，，但与C45一48组相比振幅差别均有统计学意义(P<0.05)。相同再灌注时间48h不同缺血时间组:C6O一48组较N组及C45一48组振幅均呈下降趋势，差别具有统计学意义(P<0.05);C75一48组结肠肠壁变薄，肌条弹性变差，不能耐受1g前负荷拉力，无法测量其振幅。表1模型各组与N组结肠平滑肌收缩振幅比较(n=8厉生s)分组振幅(g) 0.56士0.02C45一6 0.53士0.03C45一24 0.53士0.04C45一48 0.56士0.04C60一48 0.52士0.05*▲与空白对照组相比‘P<0.05
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R-332

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本文编号：2559202