两株抗幽门螺杆菌特异性卵黄抗体的制备及性能

发布时间：2019-11-21 11:05

【摘要】：目的分别制备抗幽门螺杆菌(H.pylori)全菌(SS1株)和尿素酶I和尿素酶B的重组蛋白(r IB)的特异性卵黄抗体(Ig Y),纯化后研究其体外抑菌效果。方法分别以超声破碎SS1菌液和r IB为抗原免疫来杭鸡,用水稀释法和硫酸铵沉淀法纯化获得相应特异性Ig Y(SS1-Ig Y、IB-Ig Y)。将特异性Ig Y与SS1混合作用后共培养检测其抑菌效果,快速脲酶试验检测其抗尿素酶作用。结果成功制备2种特异性Ig Y:SS1-Ig Y和IB-Ig Y,效价超过1∶12 800,纯度超过80%。SS1-Ig Y和IB-Ig Y均有体外抗尿素酶活性和抑菌作用。结论 SS1-Ig Y和IB-Ig Y均具有在体外抑制H.pylori尿素酶活性和抑制H.pylori生长的作用。
【图文】：

后49d2种IgY均达到峰值(1∶12800)，继续免疫后特异IgY效价不变(图1)。图1免疫蛋鸡后IgY的效价变化2．2两种方法提取抗H．pylori特异性IgY的浓度、纯度和效价第3次免疫后，IB-IgY和SS1-IgY的效价均达到1∶12800。经过10倍水稀释法［13］粗提，采用Akita和Nakai法［14］得到的IgY纯度较Wallman等［15］的纯度高，可达到85．2%，基本满足后续实验要求(表1)。采用Akita和Nakai方法获得的IgYSDS-PAGE图(图2)，在相对分子质量(Mr)66200和25000附近有明显的两条带分别为IgY的重链和轻链，SS1-IgY和IB-IgY纯度分别为85．20%和83．2%。表1两种方法提取抗H．pylori特异性IgY效价浓度纯度方法IB-IgY效价浓度(mg/mL)纯度(%)SS1-IgY效价浓度(mg/mL)纯度(%)Akita和Nakai［14］1∶1280030．4085．201∶800029．8083．20Wallman等［15］1∶1280020．3780．901∶800028．3079．13M:蛋白质Mrmarker;1:SS1-IgY;2:IB-IgY．图2纯化后的IgY电泳图2．3IgY体外抑菌涂板IgY溶液作用于新鲜H．pylori菌液涂板孵育72h，根据培养皿上的透明、湿润、针尖状大小菌落进行计数，平行3个平板。统计结果表明，SS1-IgY组和IB-IgY组与对照组(生理盐水组)相比，差异均有统计学意义(P＜0．05)，CPV-IgY与对照组相比，差异无统计学意义(P＞0．05)，SS1-IgY组和IB-IgY组之间差异也无统计学意义(P＞0．05，图3)。2．4快速脲酶试验随着时间变化，，阳性对照组H．pylori超声破碎溶液中的尿素酶作用于尿素试剂使吸光度值不断升高，尿素酶活性最强;SS1-IgY作用于H．pylori超声破碎溶液后，可明显抑制尿素酶活性;IB-IgY也具有抑制尿素酶活性的作用，但抑制尿素酶活性能力不及SS1-IgY，与SS1超声破碎溶液及生理盐水组相比，差异均有统?

后49d2种IgY均达到峰值(1∶12800)，继续免疫后特异IgY效价不变(图1)。图1免疫蛋鸡后IgY的效价变化2．2两种方法提取抗H．pylori特异性IgY的浓度、纯度和效价第3次免疫后，IB-IgY和SS1-IgY的效价均达到1∶12800。经过10倍水稀释法［13］粗提，采用Akita和Nakai法［14］得到的IgY纯度较Wallman等［15］的纯度高，可达到85．2%，基本满足后续实验要求(表1)。采用Akita和Nakai方法获得的IgYSDS-PAGE图(图2)，在相对分子质量(Mr)66200和25000附近有明显的两条带分别为IgY的重链和轻链，SS1-IgY和IB-IgY纯度分别为85．20%和83．2%。表1两种方法提取抗H．pylori特异性IgY效价浓度纯度方法IB-IgY效价浓度(mg/mL)纯度(%)SS1-IgY效价浓度(mg/mL)纯度(%)Akita和Nakai［14］1∶1280030．4085．201∶800029．8083．20Wallman等［15］1∶1280020．3780．901∶800028．3079．13M:蛋白质Mrmarker;1:SS1-IgY;2:IB-IgY．图2纯化后的IgY电泳图2．3IgY体外抑菌涂板IgY溶液作用于新鲜H．pylori菌液涂板孵育72h，根据培养皿上的透明、湿润、针尖状大小菌落进行计数，平行3个平板。统计结果表明，SS1-IgY组和IB-IgY组与对照组(生理盐水组)相比，差异均有统计学意义(P＜0．05)，CPV-IgY与对照组相比，差异无统计学意义(P＞0．05)，SS1-IgY组和IB-IgY组之间差异也无统计学意义(P＞0．05，图3)。2．4快速脲酶试验随着时间变化，阳性对照组H．pylori超声破碎溶液中的尿素酶作用于尿素试剂使吸光度值不断升高，尿素酶活性最强;SS1-IgY作用于H．pylori超声破碎溶液后，可明显抑制尿素酶活性;IB-IgY也具有抑制尿素酶活性的作用，但抑制尿素酶活性能力不及SS1-IgY，与SS1超声破碎溶液及生理盐水组相比，差异均有统?

【参考文献】

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【共引文献】

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【二级参考文献】

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4 李R

本文编号：2563979