肝脏特异基因LZP的克隆及初步功能研究

发布时间：2020-04-24 07:56

【摘要】：本研究首次从人、大鼠、小鼠中克隆了一个肝脏特异表达的新基因LZP。人LZP cDNA长2255bp，包含一个1635bp的开放阅读框，编码545个氨基酸。LZP基因位于人10号染色体长臂21区3带，长约40kb，包含9个外显子和8个内含子。小鼠LZP基因定位在10号染色体B4区，由9个外显子组成，编码2个剪接本；大鼠LZP基因定位在20号染色体长臂13区，有10个外显子。人、小鼠、大鼠LZP蛋白高度同源，同源度超过了93％。生物信息学分析表明LZP蛋白含有多个结构域，在其N端是一段信号肽，紧随其后的是3个EGF-like结构域，C端则是占了整个蛋白几乎一半的透明带结构域。基因和蛋白序列已提交至GenBank，登录号分别为AY013707(人LZP)，，AF356506(小鼠LZP variant Ⅰ)，AY180915(小鼠LZP variant Ⅱ)，以及AY353853(大鼠LZP)。 Northern杂交显示LZP基因是一个肝脏特异表达的基因，在所有被检测的组织中(人23种组织，小鼠8种组织)，只在肝脏中检测到LZP基因的表达。而原位杂交实验进一步显示LZP基因是在肝细胞中表达的。LZP基因在小鼠胚胎发育早期就开始表达，其表达甚至早于肝脏分化。尽管主要定位于肝脏细胞核膜上，LZP蛋白也可以分泌到血液里。LZP基因在肝癌组织中，无论是mRNA水平还是蛋白水平的表达量均显著下降，而这种表达量的下降至少在部分病人中与LZP基因启动子甲基化水平的加强有密切的关系。然而，LZP表达质粒转染肝细胞株L02及SMMC-7721，得到稳定表达LZP蛋白的克隆，其增殖、细胞周期、凋亡较对照都没有发生显著变化，提示LZP基因表达水平的下降在肝癌发生中可能并不起非常重要的作用。 总之，现阶段得到的数据提示LZP蛋白作为一个肝脏特异蛋白，可能在肝脏的功能及发育中起重要的作用。而且在几乎所有己检测的肝癌病人中LZP都显著下调，加之能够分泌到血液中，便于检测，因此有望成为新的肝癌临床检测指标。
【图文】：

目前尚不清楚是否有多个剪接本。序列己提交，GenBank登录号为AY353853。同源分析显示人、小鼠、大鼠L乙P蛋白高度同源，同源度超过了93%(图7)。图7人、小鼠、大鼠LZP蛋白的同源比较FIG7.MultiPlesequeneealignmentofhurnan，mouseandratLZPProteins.Conservedaminoae记5areshaded.

复旦大学博士学位论第二部分LZP基因及蛋白的基本特性二、尤2尸基因的组织表达谱为了检测人LZPmRNA在不同组织中的表达情况，我们以32P标记的部hLZPcDNA为探针，对CLONTECH23种组织的Northem膜进行杂交，结果示只在肝脏组织中检测到一条大小约为2.4Kb的条带，提示hLZP基因只在肝组织中特异表达(图8)。，O七月芝。乙。口勺已.一O一.‘己PV习吕U们﨑J.习2月合钾泞勺石口工岂嗀‘S卫三扒卢月

本文编号：2638714