OMgp不同结构域在神经突起生长抑制中的作用研究

发布时间：2020-05-10 12:35

【摘要】： OMgp(Oligodendrocyte Myeline Glycoprotein)是表达于寡突胶质细胞表面的一种GPI连接的糖蛋白，对OMgp mRNA在中枢神经系统(CNS)的表达进行测定发现，在许多神经细胞表面也表达有OMgp。但目前对它们的功能还不清楚。2002年，Wang等人用磷脂酶处理CNS髓磷脂，对释放出的蛋白质进行神经突起生长抑制能力的筛选，结果发现OMgp是唯一的抑制性蛋白，在体外具有抑制神经突起生长和诱使生长锥溃变的功能。后来的研究表明，OMgp与另外两种神经突起生长抑制因子Nogo-A和MAG竞争同一个受体NgR介导其抑制性信号的传导。研究表明，这三种抑制因子在序列上并没有同源性，因而推测三者的结合位点可能有部分重叠。 对十四种动物OMgp的蛋白序列分析发现，OMgp由几个部分构成：富含半胱氨酸的结构域(CR)、富含亮氨酸重复序列的结构域(LRR)和富含丝／苏氨酸的结构域。其中LRR结构域极为保守，在十四种动物中一致性达到86％以上。这提示该结构域可能对其功能具有重要意义。 为了对OMgp结构与功能的关系有进一步的了解，我们克隆了小鼠OMgpcDNA，，按照其结构特征分段表达了含有不同结构域的OMgp蛋白。通过与表达有NgR的CHO细胞的结合实验、GST沉降实验和对原代培养的海马锥体细胞的抑制试验证明，OMgp LRR在其神经突起生长抑制功能中起重要作用，单独的LRR结构域具有与全长OMgp蛋白几乎相同的神经突起生长抑制功能，而删除了此结构域的蛋白则失去了对神经突起的抑制作用。含有部分LRR结构域的蛋白也有较强的作用，这提示，OMgp在完成其神经突起抑制功能时，可能并不是每个亮氨酸重复序列结构域都是必须的。 为了进一步鉴定OMgp与NgR作用的最小单位，本研究使用基因突变法分别删除了OMgp LRR的不同亮氨酸富含重复序列，表达蛋白后对其功能进行研究。结果表明，删除了LRR25-56、57-133、134-180的蛋白片段没有明显的功能改变，而删除了第181-228位氨基酸的LRR蛋白虽然仍具有结合NgR的功能，但却失去 了对神经突起的生长抑制功能。这提示，在OM即与NgR结合时，可能存在多个 结合位点，而LRR 181一228则可能是OMgP最重要的功能结构域。 删除了LRR181一228的OMgP片断失去了对神经突起的生长抑制功能，但仍具 有结合NgR的功能，有可能作为神经生长抑制因子的竞争剂用于促进CNS损伤后 神经的再生。 由于目前还未得到OMgP的晶体结构，本研究使用同源模建的方法模拟了 OMgP的三维结构并进行了初步分析，为进一步对神经突起生长抑制因子与配体相 互作用及神经再生的研究奠定了基础。
【图文】：

GDIs的功能是通过在胞浆内将助。A包围起来，并抑制有活性的Rho一GTP的形成而使孙OA保持在非活性状态。当劝。一GDI结合到p75时，助。A从Rh。一GDI的抑制下释放出来，使得灿OA被GEFs激活(图2一l)。P75和助。一GDI之间的相互作用似乎与髓磷脂抑制特别相关，因为髓磷脂相关的抑制因子而非NGF能增强孙。一GDI和p75的相互作用。重要的是，能抑制灿。一GDI和p75相互作用的多肤也能中和髓磷脂的抑制作用。助。可以特异性地被一种从肉毒梭菌(CIOstridiumbotulinum)中获得的酶—C3转移酶灭活。研究显示，使用C3有可能抑制溶血磷脂酸诱导的生长锥溃变和神经突回缩(Jalinketal·，1994;Tigyietal.，1996)。一项对神经再生有重要意义的发现是，有证据表明，髓磷脂诱导的生长锥的溃变和神经突的抑制是通过Rh。的激活介导的

10nNA的鉴定gp的酶切鉴定载体比较，选取琼脂糖电泳泳速较慢者进行酶切鉴定。序列选取酶切位点，酶切位点分别位于oMgP和载体。选l、Pstl分别进行双酶切和单酶切。单酶切选用加闪反应用的星活性，双酶切使用30川反应体系。单酶切双酶切右..几‘...压‘...且卜林卜，‘l

本文编号：2657307