肠聚集性大肠杆菌中ybtE基因作用的研究

发布时间：2020-05-12 13:38

【摘要】： 毒力岛（pathogenicity island，PAI）是近几年细菌学领域出现的一个新概念，它存在于许多细菌中，可能与新病原菌的出现和细菌毒力的进化有关。其中耶尔森菌属的强毒力岛（high pathogenicity island，HPI）编码铁载体耶尔森杆菌素介导的铁摄取系统，是决定小鼠毒力必不可少的遗传单元。最近，，在部分致泻性大肠杆菌染色体上发现了HPI的存在。但HPI在致泻性大肠杆菌中的结构、功能仍不清楚。鉴于次，本文着重从以下三个方面对致泻性大肠杆菌中的HPI进行了研究。一、94株肠产毒性大肠杆菌中耶尔森菌HPI的检测采用PCR及DNA打点杂交方法，检测了94株肠产毒性大肠杆菌（enterotoxigenic E.coli，ETEC）中国分离株中的HPI基因，发现HPI 存在于14％（13/94）的菌株中，且均插入在染色体的asnT tRNA位点。通过测序分析，发现三株携带HPI的ETEC菌株，其中的整合酶基因发生了缺失。提示ETEC中的HPI至少有两种类型：整合酶完整的HPI和整合酶部分缺失的HPI。二、肠聚集性大肠杆菌ybtU、ybtT及ybtE基因的克隆及序列分析采用PCR扩增的方法，克隆了肠聚集性大肠杆菌（enteroaggregative E.coli，EAEC）17-2 HPI的ybtU、ybtT及ybtE基因。经序列分析和比较，与Yps HPI及Yen HPI的相应基因序列同源性分别高达99％及97％以上，推导的氨基酸序列同源性亦分别高达99％和97％以上。表明Yps HPI功能核心区的三个重要基因在EAEC中高度保守，EAEC中的HPI可能来源于Yps HPI。上述克隆以及结论为下一步构建相应的基因缺失突变株，确定相应基因的功能及对宿主毒力的影响奠定了基础。三、肠聚集性大肠杆菌中ybtE基因作用的研究克隆了 EAEC－2中 HPI白 yb伍基因，体外缺失 988hp，并插入卡那霉素抗性基因（ban）作为选择性标记。利用自杀质粒 pK川70作为载体，采用体内同源重组原理，将已缺失并插入 ban的 EAEC A 叩伍：：切n与＊AE C染色体的叩亿进行同源重组，缺失了＊＊＊C染色体上 ybtE基因，构建了 EAEC2 ybtE缺失突变株。为下一步 ybtE功能的研究提供了合适的宿主菌。通过对ybtE缺失突变株EAEC1铁缺陷条件下的生长监测、小鼠毒力试验、＊EpZ粘附实验及生化反应的测定，发现ybtE对EAEC的铁摄取、小鼠毒力、聚集性粘附及生化反应均无明显影响。通过本次研究，我们首次揭示了ETEC中国分离株HPI的结构特征，它整合在 asnT tRNA位点，至少以两种形式存在；首次成功地构建了 EAEC－2 ybtE缺失突变株，并在此基础上对 ybtE的功能进行了初步的、探索性研究。ybtE对EAEC的铁摄取、HEp习细胞的聚集性粘附及小鼠毒力均无明显影响。这为HPI在致泻大肠杆菌中可能不是毒力岛而是适应岛这一观点提供了强有力的证据。
【学位授予单位】：第一军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2001
【分类号】：R378.21

【引证文献】