性腺轴系的衰老变化及天年饮延缓衰老的实验研究

发布时间：2020-06-13 00:21

【摘要】：衰老是一种随着年龄增长、组织细胞老化、器官功能下降引起的不可避免的生理过程。1977年Besedovsky提出了神经—内分泌—免疫网络调节理论，而下丘脑—垂体—性腺轴（HPG轴）是其中重要的组成部分。随着机体衰老性腺功能逐渐降低，中枢神经系统对HPG轴的调节功能也发生了改变，整个HPG轴机能减退。D-半乳糖致衰老模型是大家公认、也是在衰老及延缓衰老的研究中应用比较多的衰老模型之一。本研究旨在观察D-半乳糖衰老模型HPG轴的衰老变化，完善D-半乳糖致衰老的机理研究；另外观察中药天年饮（Tiannianyin，TNY）延缓衰老的作用机制,为进一步研究中药抗衰老的作用机理奠定理论和实验基础。 一、性腺轴系的衰老变化 （一）目的 观察D-半乳糖衰老模型下丘脑—垂体—睾丸轴的衰老变化。 （二）方法 选用成年雄性SD大鼠80只（由河北医科大学实验动物学部提供）。 将80只大鼠随机分为两组：①正常组：24只，正常SD大鼠，不作任何处理；②模型组：56只，制备亚急性衰老大鼠模型。待模型制备成功后，分别用于观察衰老变化及TNY延缓衰老的研究。 1.衰老模型的建立：D-半乳糖用生理盐水配制成25%的溶液，按200mg/kg/d腹腔注射，连续40天。在造模的过程中每周测体重一次，同时观察大鼠毛色、行为等外观特征的变化情况及进行相应指标的检测，以确定模型制作是否成功。 2.大鼠经内眦取血，离心后取上清，分别检测：①采用RT-200C雷杜半自动生化分析仪检测血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）和高密度脂蛋白（HDL-C）的含量；②采用黄嘌呤氧化酶法检测血清SOD的活性；③采用酶联免疫(ELISA)法检测血清睾酮含量。 3.大鼠断头取脑，取下丘脑，采用高效液相色谱法（HPLC）以 WP=5 SHIMADZU-10A高效液相色谱仪（日本岛津）和L-ECD-6A电化学检测器（日本岛津）检测下丘脑单胺类神经递质去甲肾上腺素（NA）、多巴胺（DA）、5-羟色胺（5-HT）的含量。 4.大鼠经4%多聚甲醛+2.5%戊二醛灌注固定后，分别取下丘脑弓状核、腺垂体、睾丸，超薄切片，透射电镜下观察它们超微结构的变化。 5.大鼠经4%多聚甲醛灌注固定，取双侧睾丸，常规石蜡包埋、切片，片厚5-7μm。HE染色观察睾丸生精小管形态结构的变化；SP免疫组化法检测睾丸生精细胞PCNA、端粒酶表达的变化情况；TUNEL法检测生精细胞的凋亡情况；原位杂交方法检测p53mRNA的表达情况。 6.大鼠断头处死，取双侧睾丸，Western印迹分析方法检测大鼠睾丸p53蛋白的表达情况。 （三）结果 大鼠经D-半乳糖连续腹腔注射后，下丘脑—垂体—性腺轴及相关生化指标发生了一系列衰老变化。 1.大鼠体重与外观特征的变化 模型大鼠体重增加比例低于正常大鼠；毛色逐渐发黄，无光泽，并且出现掉毛的情况；精神状态较正常大鼠明显萎靡，活动减少。 2.血脂 模型大鼠血清TC、TG含量明显升高（与正常大鼠比较分别为P0.01，P0.05），HDL-C含量明显下降（与正常大鼠比较P0.05）。 3.血清SOD活性 D-半乳糖注射后，血清SOD活性由327.69±34.45NU/ml降至184.15±43.99 NU/ml，明显降低（P0.05）。 4.血清睾酮含量 正常大鼠血清睾酮含量为1.26±0.73 ng/ml；D-半乳糖模型大鼠血清睾酮含量为0.52±0.26ng/ml，与正常大鼠相比明显降低（P0.01）。 5.下丘脑单胺类神经递质含量 模型大鼠下丘脑NA、DA、5-HT的含量分别为681.30±80.32 ng/g、201.11±49.78 ng/g、513.09±66.52 ng/g，与正常大鼠的含量978.32±69.78 ng/g、342.11±58.77 ng/g、898.64±68.70 ng/g相比显著下降（P0.05）。 WP=6 6.下丘脑、垂体、睾丸超微结构 ⑴下丘脑弓状核：大鼠弓状核由暗神经元、亮神经元、神经胶质细胞、毛细血管及神经毡组成，D-半乳糖可使弓状核内的暗神经元、亮神经元、神经毡等结构发生衰老变化。模型大鼠暗神经元线粒体、溶酶体增多，线粒体嵴断裂、空泡化；粗面内质网脱颗粒、并形成髓样小体；高尔基体扩张。亮神经元可见核不规则，胞质内脂褐素聚集，线粒体嵴断裂，高尔基体明显扩张。另外，，弓状核内的神经毡和突触也出现异常变化。 ⑵垂体：模型大鼠垂体促性腺激素细胞超微结构明显改变，粗面内质网明显扩张，高尔基体增多、扩张，线粒体嵴断裂、空泡化，并观察到脱粒细胞。 ⑶睾丸：模型大鼠睾丸部分基膜增厚，生精细胞排列紊乱，多数细胞器变性。支持细胞胞质内溶酶体增多，内质网增生、扩张，线粒体空泡样变性。精原细胞可见胞质内出现许多空泡。另外还可见细胞膜内陷包裹线粒体或溶酶体等结构形成的凋亡小体。 ⒎睾丸生精细胞增殖、调亡及相关因素的分析 模型大鼠睾丸光镜下观察可见生精小管部分基膜增厚、不完整，生精小管内生殖细胞减少，排列稀疏。生精细胞增殖、调亡及相关因素分析结果如下： ⑴PCNA：免疫阳性细胞主要包括精原细胞和初级精母细胞，部分支持细胞和肌样细胞核也可见着色；免疫阳性产物位于细胞核，通常为棕黄色颗粒。PCNA阳性细胞率模型组与正常组相比明显降低（P0.01）。 ⑵凋亡：各组大鼠睾丸生精细胞均有凋亡发生，凋亡细胞位于生精小管近基底部，在模型大鼠凋亡细胞成簇存在，区别于正常大鼠凋亡细胞单个散在。凋亡细胞包括精原细胞和
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R33;R285

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 叶淑英;李勇生;;健脾清心汤治疗更年期综合征78例临床分析[J];放射免疫学杂志;2011年04期

2 邵敬於;;人类的诱发排卯[J];世界临床药物;2011年06期

3 梁文娜;李灿东;高碧珍;沈建英;廖凌虹;张凌媛;;天癸盛衰调控绝经后骨质疏松物质本源的探讨[J];中华中医药学刊;2011年08期

4 苑淑肖;;中药周期疗法结合氯米芬治疗排卵障碍性不孕40例[J];福建中医药;2011年02期

5 张倩;张冰;李连珍;冉剑虹;林志健;;肉桂油对大鼠内分泌-免疫系统的影响[J];中华中医药杂志;2011年08期

6 孔德强;李爱学;曾林;赵彦斌;孙兆增;胡仲明;;一种比格犬雌二醇β受体剪切异构体的克隆和序列分析[J];中国比较医学杂志;2011年07期

7 李慧婷;李虹;张涛;;二仙止崩汤联合米非司酮治疗围绝经期功能性子宫出血[J];中国实验方剂学杂志;2011年16期

8 李娜;;超声影像检查在诊断女孩真性性早熟中的应用[J];现代预防医学;2011年17期

9 刘军辉;;甲硝唑联合盐酸氟桂利嗪治疗老年性阴道炎90例临床观察[J];河北中医;2011年08期

10 张敏;王箭;杜敏;;高压氧与体外受精-胚胎移植[J];医学综述;2011年17期

相关会议论文 前10条

1 王丽敏;陶恩祥;王丽娟;;不同亚型帕金森病患者血浆单胺类神经递质的研究[A];中华医学会第七次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2004年

2 苏晶;徐丽林;;不同光照制改变对大鼠海马单胺类神经递质影响的研究[A];2004全国时间生物医学学术会议论文集[C];2004年

3 魏群利;刘翠萍;孙敏;刘超;;消可宁口服液对糖尿病大鼠下丘脑饱觉中枢(VMH)单胺类神经递质的影响[A];全国首届代谢综合征的基础与临床专题学术会议论文汇编[C];2004年

4 辛玉虎;;阿片类药物对性腺轴和肾上腺轴的损伤[A];第四届全国中西医结合戒毒学术研讨会教材、论文摘要集[C];2000年

5 牛嗣云;寇素茹;刘晋芝;高福禄;;松花粉对雄性衰老大鼠性腺轴分泌功能的保护作用[A];中国解剖学会2011年年会论文文摘汇编[C];2011年

6 蔡德培;;环境内分泌干扰物对垂体—性腺轴相关的基因调控网络的不良影响及其中药治疗的拮抗作用[A];2008年神经内分泌暨神经免疫内分泌学术研讨会论文摘要汇编[C];2008年

7 罗小光;王慧群;罗能先;姜铭;;穴位埋线配合运动、饮食调整对更年期肥胖妇女的减肥疗效评价[A];中华中医药学会中医美容分会学术年会论文集[C];2009年

8 王斌;张蕴琨;蒋晓玲;李靖;;运动对大鼠纹状体、中脑和下丘脑内单胺类神经递质含量变化相互关系的影响[A];第七届全国体育科学大会论文摘要汇编（二）[C];2004年

9 宋亚军;孙勤枢;王鲁克;王宁;梁玉记;谢敏豪;;中药对急性耐力运动后及恢复期大鼠不同脑区单胺类神经递质的影响[A];第七届全国体育科学大会论文摘要汇编（二）[C];2004年

10 胡庆伟;康白;高尔;李广宙;李锋杰;;赛庚啶对大鼠下丘脑-腺垂体-性腺轴和催乳素细胞内分泌功能及钙调蛋白基因表达的影响[A];中国药理学会第八次全国代表大会论文摘要集（第二部分）[C];2002年

相关重要报纸文章 前10条

1 本版采写 王颖颖 张柏滔;治疗性功能低下修复性腺轴是关键[N];成都日报;2004年

2 章杰;痢特灵：“有我没他！”[N];医药经济报;2001年

3 于欣　罗刚;新型抗抑郁药路在何方[N];健康报;2007年

4 辽宁中医学院 赵秋英;中医如何看待男性更年期综合征[N];上海中医药报;2006年

5 ;淫羊藿对性腺功能有直接调整作用[N];中国中医药报;2005年

6 ;可以“延年益寿”的药物[N];医药导报;2007年

7 吕保民;减肥过度损性趣[N];大众卫生报;2003年

8 健康时报记者 赵晴晴;卵巢保护越早越好[N];健康时报;2008年

9 常虹;呋喃唑酮的忠告[N];医药经济报;2004年

10 刘铨;不育症治疗要因病而异[N];健康报;2006年

相关博士学位论文 前10条

1 陈志宏;性腺轴系的衰老变化及天年饮延缓衰老的实验研究[D];河北医科大学;2004年

2 阮国洪;乐果对单胺类神经递质的影响[D];复旦大学;2006年

3 牛嗣云;松花粉抗下丘脑—垂体—睾丸衰老机理的研究[D];河北医科大学;2006年

4 魏群利;针灸治疗非胰岛素依赖性糖尿病临床及实验研究[D];南京中医药大学;2001年

5 咸铁岩;“益气调血，扶本培元”针法改善多发梗塞性痴呆模型大鼠学习记忆功能及其神经生化机制研究[D];天津中医学院;2004年

6 杨金蓉;川芎挥发油解热作用及其部分机理探讨[D];成都中医药大学;2002年

7 索玉平;“坤宁安”对PMS大鼠下丘脑ER及其mRNA与神经递质影响的研究[D];黑龙江中医药大学;2002年

8 周建英;益气复智颗粒治疗血管性痴呆的研究[D];南京中医药大学;2004年

9 徐晓娟;补经合剂治疗月经后期或伴量少调经机制的实验研究[D];成都中医药大学;2002年

10 余泽生;“健脑醒神”胶囊改善老年性痴呆记忆减退的作用及机理研究[D];成都中医药大学;2003年

相关硕士学位论文 前10条

1 张戈;缺血性脑损伤后单胺类神经递质改变及胰岛素的治疗作用[D];第四军医大学;2001年

2 邱艳明;电针对抑郁模型大鼠单胺类神经递质影响的实验研究[D];北京中医药大学;2002年

3 黄彦妮;三氯化铝对大鼠不同脑区单胺类神经递质含量的影响[D];广西医科大学;2001年

4 石忠峰;“肝主疏泄与单胺类神经递质和性激素及其调节激素有关”假说新证据[D];山东中医药大学;2002年

5 宋海霞;养殖牙鲆垂体—性腺轴的生理功能及其调控研究[D];中国海洋大学;2005年

6 华莉;蠲痛汤对皮肤痛敏模型大鼠镇痛作用及其相关机制的实验研究[D];成都中医药大学;2004年

7 阚湘苓;痰证及痰证与衰老关系的理论与实验研究[D];天津中医学院;2001年

8 杨志东;HPLC-电化学检测器测定单胺类神经递质的研究[D];天津大学;2006年

9 连亚娜;滋肾丸治疗去卵巢雌鼠骨质疏松实验研究[D];成都中医药大学;2008年

10 段玲玲;静安口服液对小儿多发性抽动症神经递质影响的机理研究[D];南京中医药大学;2009年

本文编号：2710331