脂筏—前B细胞集落增强因子与胰岛素通路作用的新视角

发布时间：2020-06-13 02:27

【摘要】：目的：前B细胞集落增强因子(pre-B cell colony enhancing factor, PBEF)是联系炎症与胰岛素抵抗的桥梁,是研究和治疗炎症所致胰岛素抵抗的潜在靶点。然而PBEF与胰岛素通路是否存在相互作用及其机制一直存在很大争议。脂筏作为膜信号转导的重要平台,在胰岛素信号通路中发挥着重要作用。本研究首次从一个全新的角度——脂筏来探究PBEF与胰岛素受体(insulin receptor, IR)及胰岛素信号通路相互作用的机制,以期揭示炎症所致的胰岛素抵抗的新机制。方法：采用去垢剂及非去垢剂法从A549细胞系中提取脂筏,鉴定PBEF与IRβ在脂筏内外的分布。构建重组PBEF质粒及其突变质粒S199,提取PBEF及S199蛋白,研究PBEF对IRp在脂筏内外分布的影响。运用免疫共沉淀(immunoprecipitation, IP)研究PBEF、IRβ与Caveolin-1(Cav-1)的相互作用,及其与Cav-1磷酸化的关系。采用不同时间点研究PBEF对胰岛素诱导的Akt活化的影响。结果：PBEF在脂筏内外均有分布,而IRp在非去垢剂法中仅存在于脂筏。PBEF能诱导IRβ从脂筏转移至非脂筏,NAD也具有类似作用,但该作用不能完全被S199和FK866阻断。IRβ、PBEF与Cav-1三者相互结合。PBEF可导致非脂筏中与IRp结合的Cav-1磷酸化水平明显增加。给予胰岛素处理5min内加入PBEF,Akt的磷酸化水平较胰岛素单独作用时降低；而给予胰岛素处理5min后再加入PBEF,Akt的磷酸化水平部分恢复。结论： 1、PBEF在脂筏内外均有分布。PBEF能诱导IRp从脂筏转移至非脂筏,该作用部分依赖其Nampt酶活性。 2、IRβ、 PBEF与Cav-1三者相互结合。PBEF促进磷酸化Cav-1与IRp共同移向非脂筏,且该作用与其Nampt酶活性相关。 3、PBEF能影响胰岛素诱导的Akt活化,且该作用具有时间依赖性。
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R363

【参考文献】