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人B淋巴细胞活化相关基因的克隆及其功能初探

发布时间:2020-06-22 17:43
【摘要】:B淋巴细胞是机体重要的免疫活性细胞,在机体免疫应答中,B细胞接受抗原或其它因素的刺激后,发生活化、增殖及分化,产生应答效应。因此,B细胞的活化是B细胞行使其功能的重要前提。众多研究表明,B细胞由静止向活化状态转变的过程,伴随着一系列基因表达的变化,其中某些基因的表达水平上升,有些基因的表达却下降,正是这些差异表达基因的产物之间的相互作用,导致静止的B细胞进入活化状态。然而,迄今为止我们对此过程中的的基因调控机制还所知甚少。分离与B细胞活化相关的基因,阐明基因在B细胞活化过程中的功能,有助于对B细胞发育、成熟和分化等生理过程的了解以及对与B细胞源性的免疫系统失常所引起疾病(如B淋巴细胞源性的白血病、自身免疫疾病和B淋巴细胞瘤等)的发病机制的分析奠定了基础。因此,B细胞活化相关基因的研究一直是分子免疫学的研究热点之一。 为了克隆B细胞活化相关的基因,我们在前期工作应用差异显示反转录PCR(DDRT-PCR)方法,比较人扁桃体静止B细胞和活化B细胞中的基因表达差异,获得了62条差异显示带(expressed sequence tag,EST)的基础上,本研究采用了以下研究策略和路线,以寻找与这些EST所对应的基因。首先,采用Northern杂交的方法来去除所获得的假阳性EST;其次,一方面,运用活化B细胞中高表达的EST筛选人活化B细胞的cDNA文库以期获得与之相对应的全长基因。另一方面,利用生物信息学知识,综合EST拼接、cDNA末端快速扩增(RACE)和RT-PCR等实验技术,克隆与
【学位授予单位】:中国协和医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:R392;Q78
【图文】:

B细胞,程度


A.negtiveeont:·01B.FIM:389C.FIM:907图ZB细胞活化程度的检测FigureDeteetiontheaetivationofBeellbyFACSA:negativeeontro1B:0hrC:48hreseen。eintensitymean(FIM)refertotheexpressionint。nsityofHLAllmomantonsilBeells

甲醛,琼脂糖凝胶电泳,差异显示,Northern杂交


总RNA中没有明显的蛋白质及盐离子的污染。经1%甲醛琼脂糖凝胶电泳显示,所提取总RNA28S和185两条带型清晰,表明所提取的组织总RNA完整性较好,无明显降解(图4)l2洲5州乙000八

本文编号:2726021

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