重组蓖麻毒素B链调节免疫细胞活化及其对信号传导通路的影响

发布时间：2020-07-09 18:32

【摘要】：蓖麻毒素（RT）由RTA、RTB两个肽链以二硫键共价相连接。RTB是能与半乳糖/N-乙酰基半乳糖胺特定结构结合的外源凝集素蛋白，具有凝集素活性。RTB本身无毒性，但可以帮助RTA转运到细胞溶质中，抑制蛋白质的合成。文献报道，RTB可以用作异源性疫苗抗原的载体，可融合不同的轮状病毒抗原VP7、P24、NSP4等，发挥粘膜佐剂作用。课题组前期研究亦发现RTB作为佐剂能诱导产生狂犬病毒中和抗体，抗体水平显著高于普通氢氧化铝佐剂疫苗，并能加速狂犬病毒疫苗诱导的体液免疫应答。然而对于RTB更多的生物学活性及机制研究国内外报道甚少。RTB对免疫细胞活化及细胞内的信号传导通路的影响国内外未见报道。本研究采用分子生物学与免疫学技术探讨了RTB对免疫细胞活化及细胞内的信号传导通路的影响。首先探讨了RTB对小鼠免疫细胞活化功能的影响。研究发现，RTB可明显促进小鼠脾脏淋巴细胞增殖；促进淋巴细胞培养上清中Th1型细胞因子的分泌；并发现RTB可促进CD4+T细胞的增殖和活化。RTB对小鼠RAW264.7巨噬细胞的活化功能与机制研究表明：RTB可促进RAW264.7细胞NO的分泌；促进iNOS基因与蛋白的表达；增强巨噬细胞的吞噬能力；促进IL-6和TNF-α基因与蛋白的表达。采用小鼠蛋白芯片抗体阵列对巨噬细胞与炎症相关的40种蛋白的变化进行检测，结果发现MCP-1、TNF-α、MIP-1α，MIP-1β，MIP-2，RANTES，TIMP-1，CD54的表达增高，G-CSF、KC的表达下调。RTB对RAW264.7巨噬细胞活化过程中的信号转导通路的影响研究表明：酪氨酸蛋白激酶介导的信号通路抑制剂、蛋白激酶C信号通路抑制剂和核因子κB信号通路抑制剂，可以抑制RTB诱导RAW264.7细胞NO分泌和iNOSmRNA表达以及TNF-α和IL-6mRNA和蛋白水平表达，提示酪氨酸蛋白激酶、蛋白激酶C和核因子κB信号通路可能参与RTB诱导巨噬细胞活化。采用RTB对酪氨酸蛋白激酶信号通路相关磷酸化位点分子进行蛋白组学分析，结果提示RTB通过影响RAW264.7细胞酪氨酸蛋白激酶信号途径SRC、JAK-STAT和核因子κB信号途径IκB-α蛋白磷酸化，激活酪氨酸蛋白激酶和NF-κB信号转导途径。 Western blot和免疫荧光实验结果进一步证实RTB通过诱导巨噬细胞IκB-α磷酸化进而促进NF-κB核转位作用。 上述结果提示RTB可以调节免疫细胞活化，对巨噬细胞的活化可通过细胞内的多条信号转导途径参与。提示RTB诱导巨噬细胞活化可能通过多条信号转导途径互相调节、共同作用。本研究为RTB免疫生物学活性研究及其免疫佐剂等方面的应用提供了新的科研资料，并奠定了实验依据与理论基础。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R392.12

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本文编号：2747833