MicroRNA-27a调控抗病毒天然免疫应答及其机制研究

发布时间：2020-08-17 15:42

【摘要】：当机体受到病毒感染时,免疫细胞将通过模式识别受体识别病毒成分并活化下游的信号通路,从而表达I型干扰素(Interferon, IFN)和促炎症细胞因子。其中,I型干扰素在激发抗病毒免疫应答中发挥关键作用,并且其表达受机体精确调控,而病毒本身也能干预抗病毒信号通路,实现其对机体抗病毒天然免疫的逃逸进而增强自身的复制。病毒干预和逃逸机体抗病毒天然免疫应答的机制是天然免疫研究的重大科学问题。此外,miRNA在天然免疫应答的调控中发挥关键作用,病毒在miRNA层面与机体的相互作用和机制目前受广泛关注。据此,本研究拟通过探求在病毒感染过程中胞内表达改变的miRNA并进一步研究其作用机制,以寻求病毒通过调控机体miRNA的表达进而干预抗病毒天然免疫应答和实现免疫逃逸的分子机制。我们先期通过高通量miRNA芯片筛选,发现在RNA病毒VSV感染小鼠腹腔巨噬细胞的过程中,miR-27a的表达显著降低。进一步研究发现,miR-27a的表达受到IFN/JAK/STAT1信号通路的调控,并且依赖于RUNX1蛋白。miR-27a的表达下调将显著抑制病毒诱导的I型干扰素产生进而增强病毒自身的复制。在分子机制研究中,通过小鼠全基因组表达谱芯片发现,miR-27a能够靶向作用于唾液酸凝集素受体Siglecl和TRIM家族的E3泛素化连接酶TRIM27,过表达miR-27a后能在mRNA和蛋白水平上降低Siglecl和TRIM27的表达。进一步研究发现,Siglecl能与DAP12相互作用,进而活化酪氨酸磷酸酶SHP2,活化的SHP2能招募E3泛素化连接酶TRIM27后作用于TBK1,使TBK1上251位和372位的赖氨酸残基发生K48位连接的泛素化修饰进而促进其在蛋白酶体中降解,最终导致负向调控I型干扰素的表达。我们构建了miR-27a-sponge的转基因小鼠,在体内进一步验证miR-27a的功能,当腹腔注射VSV后,与对照组相比,miR-27a-sponge小鼠血清中的IFN-β的表达量显著降低,HE染色发现,小鼠肺脏中炎症细胞浸润更明显,肝、脾、肺中VSV病毒的复制更强。由此,我们证明了病毒感染诱导表达下调的miR-27a能靶向增强负调控因子Siglecl和TRIM27的表达,促进TBK1的降解,进而反馈抑制I型干扰素的表达和增强病毒自身的复制,即病毒利用miR-27a来实现自身的免疫逃逸,因此我们发现了一种病毒逃逸抗病毒天然免疫的新机制。
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R392
【图文】：

然而，病毒诱导下调的ｍｉＲ－２７ａ在抗病毒天然免疫应答中的功能仍然未知。逡逑我们进一步研究发现，ＶＳＶ感染巨嘘细胞后ｍｉＲ－２７ａ表达依赖于ＶＳＶ刺激的剂量逡逑和时间，并且在ＭＯＩ值为１时或ＶＳＶ感染后２４ｈ达到最低值（图３．１ａ）。在ＲＮＡ逡逑滴毒ＳｅＶ感染后，同样在巨嘘细胞中下调ｍｉＲ－２７ａ的表达（图３．化）。逡逑巧逡逑２邋１－５＾逦２邋１．５－逡逑Ｃ逦Ｃ逡逑｜１。－曲逦｜ｌ．。－瞧逡逑Ｉ邋国‘逦｜｜Ａ逡逑｜：ｌｌｌｗ邋ｉｌｌｌｌｌｍｉ逡逑Ｇ邋＾逦尽邋Ｅ邋Ｏｈ邋６ｈ邋８ｈ１２ｈ２４ｈ３６ｈ逡逑。ＶＳＶ邋ＭＯＩ逦ＶＳＶ逡逑ｂ逡逑｜ｌ－５－逡逑ｌｌ．Ｏ邋＊邋＾逦１１．０－曲逡逑ｉｌｌｌｌｌｌｌ邋ｉｌｌｌｉｌｌｔｌ逡逑Ｅ邋＇逦0０、0、0＞、令邋Ｓ＇邋Ｏｈ邋４ｈ邋６ｈ１２ｈ２４ｈ３６ｈ逡逑0邋ＳｅＶ邋ＭＯＩ逦ＳｅＶ逡逑图３．１病毒感染显著下调小款腹膛巨嗤细胞中ｍ瓜－２７ａ的表达逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋３．１邋Ｖｉｒａｌ邋ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ邋ｓｉｇｎｉｆｃａｎｔｌｙ邋ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｓ邋ｍｉＲ－２７ａ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．邋（ａ，ｂ）逡逑Ｑ－ＰＣ民邋ａｎａｌｙｓｉｓ邋ｏｆ邋ｍｉ民－２７ａ邋ｉｎ邋ｐｒｉｍａｒｙ邋ｐｅｒｋｏ打ｅａｌ邋ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ邋ｉｎｆｅｃｔ；ｅｄ邋ｗｉｔｈ邋ＶＳＶ邋（ａ）逡逑ｏｒ邋ＳｅＶ邋（ｂ）邋ｆｏｒ邋２４邋ｈ：邋ｏｒ邋ｉｎ托ｃｔｅｄ邋ｗｉ化邋ＶＳＶ邋（ａ）邋ｏｒ邋ＳｅＶ邋（ｂ）邋ａｔ邋ａｎ邋ＭＯＩ＝ｌ邋ｆｏｒ邋化ｅ邋ｉｎｄｉｃａｔｅｄ逡逑ｔｉｍｅ

图３．６邋ｍｉＲ－２７ａ不能直接X1向于ＶＳＶ的ＲＮＡ逦ｉｕ化邋３．６邋ｍｉＲ－２７ａ邋ｄｏｅｓ邋ｎｏｔ邋ｄｉｒｅｃｔｌｔａｒｅｔ邋ＶＳＶ邋ＲＮＡｓ．－ＰＣ民邋ａｎａｌｓｉｓ邋ｏｆ邋ＶＳＶ逦

长ＴＲＩＭ２７相互巧时，也同样发现只有含Ｃｏｉｌｅｄ－ｃｏｉｌ结构域截短体才能与ＴＲＩＭ２７逡逑相互结合，这证明ＴＲＩＭ２７－ＴＢＫ１之间的结合是依赖于它们各自的Ｃｏｉｌｅｄ－ｃｏｉｌ结构逡逑域（图３．１６ａ，ｂ），这与Ｃｏｉｌｅｄ－ｃｏｉｌ结构域的功能是一致的，据报道该结构域能引逡逑起同源和异源蛋白之间的相互作用，从而形成二聚体或蛋白质的复合物。同时我逡逑们也发现

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本文编号：2795513