表面梯度化材料对内皮细胞黏附与迁移影响的研究

发布时间：2020-08-20 07:28

【摘要】： 为探讨表面梯度化材料对内皮细胞的黏附与迁移行为的影响,我们通过不同方式体外构建材料表面I型胶原蛋白梯度(蛋白密度梯度和图案化不同曲率和弧度梯度的蛋白基底),来研究内皮细胞在梯度表面的黏附状态和运动趋化性。实验一通过连续碱水解聚乳酸膜制备形成羧基密度,并共价偶联胶原蛋白形成相应的蛋白密度梯度。接触角测量仪和激光扫描共聚焦显微镜分别表征了- COOH密度梯度和胶原蛋白密度梯度,通过荧光显微镜可观测到明显的胶原蛋白梯度,以上结果证实了聚乳酸薄膜上通过连续碱水解方法制备胶原蛋白梯度的可行性。在低密度和中间密度的胶原蛋白梯度区域培养的内皮细胞表现出较强的沿着梯度方向的运动性(净迁移,趋化指数,迁移率和细胞轨迹证实),然而,内皮细胞在高浓度蛋白密度区域的运动与胶原蛋白梯度反向。结果表明,细胞运动受胶原蛋白梯度趋向,但必须是适宜的利于细胞黏附的蛋白密度。实验二基于仿生学原理,根据人体内不同种类和不同口径(从最细小的毛细血管到大动脉)的血管厚度和弯曲度不同设计出一系列弧度梯度(20μm,60μm,100μm弧度宽度),并运用微接触印刷技术制备出不同曲率半径的胶原蛋白基底,扫描电子显微镜和光学显微镜检验PDMS印章表面平整度,激光共聚焦显微镜检验基底蛋白黏附情况和均匀度,细胞骨架蛋白肌动蛋白和粘着斑蛋白染色观测细胞粘附状态,活细胞工作站对细胞6h运动情况进行录像,运用相关软件测定20,60,100μm弧度宽度梯度之间或自身不同曲率半径之间的细胞迁移速度和细胞迁移总位移与净位移比值。结果表明细胞的黏附状态与弧度宽度成正比;设计的曲率半径越小,迁移速度越快,运动性越强;在不同弧度宽度的材料表面细胞运动能力如下:100μm20μm60μm。本研究分析了内皮细胞在不同形式的胶原蛋白梯度上的一系列运动迁移参数,获得了内皮细胞黏附、运动迁移的最适宜的蛋白梯度基底,为进一步研究内皮细胞化学诱导运动性提供依据,为植入体在植入宿主后的微循环血管新生中的脉管重塑和血管再生提供新的思路,为组织工程血管支架材料的内皮化提供理论依据。
【学位授予单位】：重庆大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R329
【图文】：

的细胞骨架蛋白，其主要是在细胞连接中将肌动蛋白结合蛋白，在细胞连接和与基底黏附中有重发生适当的黏附才能进行增殖、迁移和运动，若多，粘着斑稳定且增多，细胞的运动性则减弱；骨架连接的机械强度，粘着斑减少，细胞的运动括 6 个步骤如图[42]：①细胞感受外来信号。②细胞周围产生大量黏着斑[44-47]；④细胞骨架收后在前进方向形成新的黏着点[48-49]。⑤后部应力许多病变或肿瘤组织中，受肿瘤内炎性因子趋化入到肿瘤实体内形成新生的血管[50-52]，在这一度材料，通过观察细胞骨架蛋白和粘着斑蛋白判效控制细胞在病变过程中的运动迁移，就能够控，达到预防和治疗病变组织的效果。

多次测量得到平均值，使液滴流速达到 1证液面完全覆盖聚乳酸膜(55 mm×25 mm)，后续实大小与玻片大小一致(55 mm×25 mm)，特定夹子固 的 NaOH 溶液置于订制的接触角测量仪分液瓶符合，将包被聚乳酸膜的玻片竖立放入特定容器中，打反应容器中，开始计时。同时间制备均一羧基密度浸泡在 1 mol/L 的 NaOH 溶液中。同时将未经过碱浸泡在碱液中的载玻片，用大量 0.1 mol/L 的 HCl 解时，产生游离羧基，用 HCl 冲洗水解后的材料，可风干，置于热风干燥箱中 37℃干燥至材料表面无可于后期实验（为方便计算，将聚乳酸膜按照羧基浓 0-55 mm）。

[75]。本实验硅片模板由德国光学科技研究所利用软刻蚀技术。本实验所设计图形尺寸如图2.7中所示，根据设计图案利用光刻技术制备硅片模板。图2.7模板设计图，弧度宽度分别为①20μm②60μm③100μmFig.2.7 Scheme of the masker, the width of the radian is ①20μm②60μm③100μm②.PDMS印章的制备1）聚二甲基硅氧烷Sylgard184与交联剂按10:1的比例混合，充分搅拌混合后，放入真空干燥箱中抽真空30min，除去混合物中气泡。2）将真空处理后的混合液均匀涂覆于模板表面，再将模板抽真空30 min。取出后放入70℃恒温箱中交联12 h，然后将PDMS印章和模板剥离，清洗印章表面备用。PDMS印章制备流程图如图2.8

【参考文献】

相关期刊论文 前2条

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2 林少芬,唐仕波,胡洁,郑健j,郑湖铃,罗燕;人血管内皮细胞体外培养及鉴定[J];眼科学报;2000年02期

本文编号：2797699