γδT细胞对EB病毒转化B淋巴细胞的免疫识别

发布时间：2020-08-21 20:11

【摘要】：本研究的目的:γδT细胞与肿瘤免疫有着密切联系,本研究旨在通过建立EB 病毒(EBV)转化人类B 淋巴细胞的模型,从而研究细胞转化前后膜表面分子的表达情况变化及γδT细胞对其的杀伤作用,以期找到γδT细胞识别的肿瘤抗原,为肿瘤的诊断和治疗提供一定的帮助。所采用的方法:(1) 将EBV 与人类B 淋巴细胞共同培养,建立EBV 转化B 淋巴细胞的模型;(2)通过流式细胞仪检测EBV 转化前后B 淋巴细胞表面HSP60 和HSP70 的表达情况;(3)用MTT法检测γδT细胞对EBV 转化前后B 淋巴细胞的杀伤作用;(4)用抗HSP60、HSP70 抗体封闭EBV 转化后的B 淋巴细胞,测定γδT细胞对其的杀伤作用;(5)提取标本总RNA,用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)分析EBV 转化前后B 淋巴细胞中MICA 基因的表达。本研究取得以下结果:(1)EBV 转化人的B 淋巴细胞和单个核细胞(PBMC)中的B 淋巴细胞获得成功,EBV 转化人的全血中的B淋巴细胞则未获成功;(2)正常B 淋巴细胞极少表达HSP60、HSP70,而EBV 转化后的B 细胞则几乎均表达HSP60 和HSP70 ;(3)自体γδT细胞对B 淋巴细胞有轻微的杀伤作用,而γδT细胞对EBV 转化后的B 淋巴细胞的杀伤作用较之正常B 淋巴细胞高出10 余倍;异体γδT细胞对转化前后B 淋巴细胞都有显著的杀伤作用;(4)γδT细胞对EBV 转化后B 细胞的杀伤作用可为抗HSP60 和HSP70 抗体所明显阻断;(5)正常B 淋巴细胞不表达MICA 基因;而EBV 转化后的B 淋巴细胞则表达MICA 基因。
【学位授予单位】：中国协和医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2001
【分类号】：R392
【图文】：

γδT细胞,表面热,免疫荧光染色,荧光染色

固相抗体法体外扩增的γδT 细胞的免疫荧光分析外培养 14 天的外周血γδT 细胞系经抗 TCRγδ- FITC 和抗 TCRαβ- P结果。.Fluorescences analysis of γδT cell lines expanded by solie antibody method in vitro.δT cell lines from a normal individual after 14 days of culture were staineti-TCRγδ-FITC and anti-TCRαβ-PE respectively.靶细胞表面热休克蛋白的免疫荧光染色疫荧光染色流式细胞仪分析 EBV 转化前后 B 淋巴细胞表面、HSP70 表达情况。如图 2 可见，1.8%的正常 B 淋巴细胞表 HSP60，1.2%的正常 B 淋巴细胞表面表达 HSP70，99.7%的

免疫荧光,EBV转化,B淋巴细胞,淋巴细胞

D图 2．EBV 转化前后 B 淋巴细胞表面 HSP60、HSP70 的免疫荧光析EBV 转化前后 B 淋巴细胞经抗 HSP60、HSP70 抗体（小鼠 IgG1）、羊IgG1抗体-FITC 染色结果：A．B 淋巴细胞抗 HSP60 染色；B．EBV 转化后巴细胞抗 HSP60 染色；C．B 淋巴细胞抗 HSP70 染色；D．EBV 转化后 B 淋胞抗 HSP70 染色。Fig 2.Fluorescences analysis of hsp60 and hsp70 on membrsurface of B-lymphocytes and EB virus transforB-lymphocytes.B-lymphocytes and EB virus transformed B-lymphocytes were stained anti-hsp60，anti-hsp70 and sheep-anti-mice-FITC respectively. A. B-lymphocytes stained

电泳图,MICA基因,B淋巴细胞,电泳图

M A B C D化前后 B 淋巴细胞 MICA 基因表达电泳图ctrophoresis of MICA gene from B-lymph transformed B-lymphocytesNA 分子量标准(2kb，1kb，750bp，500bp，250b：转化后 B 淋巴细胞扩增出短片段(约 700bp)；B扩增出长片段(约 1400bp)；C：B 淋巴细胞未扩细胞未扩增出长片段。A Marker (six zones: 2kb，1kb，750bp，500bp，250agment from EB virus transformed B-lymphocytes(ag fragment from EB virus transformed B-lymphC：no short fragment from B-lymphocytes；D：no lphocytes.

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