日本血吸虫新疫苗分子筛选鉴定及细胞因子对核酸疫苗免疫的调节

发布时间：2020-09-10 07:47

　　 本研究着重于对日本血吸虫(Sj)雄虫源性抗原候选疫苗分子的筛选鉴定和保护性免疫的研究，以及细胞因子对核酸疫苗免疫的调节研究二大部分。 为获得Sj雄虫特异性抗原疫苗候选分子，开展了Sj雄虫天然组分抗原的分离鉴定及保护性免疫研究。采用SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)比较分析Sj雄性、Sj雌性的抗原组分，Western blot检测组分蛋白的抗原性和性别特异性，动物实验评估抗原的免疫保护效果。结果发现Sj雄虫可溶性抗原含一高丰度带，为44.6kDa，Sj雌虫可溶性抗原中未见类似带。通过SDS-PAG胶切法，获高纯度44.6kDa蛋白。Western blot检测44.6kDa蛋白具抗原性和雄虫特异性，并诱导小鼠产生39.31％的减虫率和41.98％的减卵率，与对照组比差异有显著性(p＜0.001)。有关其抗雄虫特异性免疫值得今后研究。 为寻找雄虫抗原表位模拟肽分子，从表位分子水平构建Sj新型疫苗，作者进行了Sj雄虫抗原表位模拟肽的筛选及其保护性免疫研究。用抗Sj雄虫抗原的IgG筛选噬菌体随机肽库，获得多个阳性噬菌体克隆，Dot-ELISA鉴定其具有抗原性。用混和阳性噬菌体克隆免疫小鼠获31.72％的减虫率和51.54％的减卵率，与对照组比差异有显著性(p＜0.001)，表现为抗Sj感染和抗生殖作用。 为发现雄虫特异性的基因及其编码的靶抗原分子，从基因水平揭 示V性别特异性差异，采用U雄虫免疫血清筛选对成虫CDNA文库， 对部分阳性克隆的插入片段进行 PCR鉴定及测序。结果获得 11个阳 性克隆，通过互联网进行核着酸序列同源性分析，发现三个新基因， 百 分M、Cps和＃ps（GenBan 注册号分别为AF519808、AF524896 和 AF517843入 它们的预测编码蛋白可能为存在于胞浆和胞核内的信 息传递分子，三个新基因是否为雄虫性别特异性值得进一步探讨。对 SfMA进行了亚克隆及原核表达，并用表达产物免疫小鼠。结果获得 SJ－MA原核表达的重组体，并在ECOli中高效表达。SDS－PAGE和 Western blot显示融合蛋白为54．skDa具良好的抗原性。融合蛋白与 FCA混合免疫小鼠可诱导高滴度的特异性格G抗体，免疫组的减虫率 及减卵率分别为34．29％与48．76凡 与对照组比差异有显著性 （／0．001人表明新基因 SfMA表达蛋白能诱导小鼠抗 SJ的保护性 免疫，提示其作为U疫苗候选分子的潜在价值。 为研究细胞因子DNA对核酸疫苗免疫的调节，作者分别构建了 小鼠 IFN个和小鼠几对真核表达重组质粒，并首次分别联合 SJ组织 蛋白酶B DNA疫苗免疫小鼠，通过免疫酶组织化学技术观察两种质粒 DNA在小鼠肌肉细胞的表达，通过减虫率减卵率评估免疫保护性作用。 结果两种细胞因子质粒和 DNA疫苗在小鼠肌肉细胞分别同时表达，其 中 IFN一下白显著增强 DM疫苗的减虫率（27．37％，P＜0，05），而几一4 能显著增强＊A疫苗的减虫率不减卵率（43．200和 76．63O，／0，01）。 为研究 Th型和 ThZ型应答优势分别对 DNA疫苗免疫的调节奠定基 石出。
【学位单位】：中南大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2003
【中图分类】：R392
【部分图文】：

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本文编号：2815565