CCK-8对LPS诱导大鼠肺间质巨噬细胞活化的抑制作用及其信号转导机制的研究

发布时间：2020-09-22 20:47

　　炎症失控是感染性疾病并发多器官功能障碍的主要发病机制，单核-巨噬细胞的活化在诱导炎症反应中起关键作用。在脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)或其它致炎因素作用下，巨噬细胞生成并释放大量的促炎细胞因子，包括TNT-α、IL-1β、IL-6等，这些细胞因子的过量释放可引起机体自身组织损伤，导致过度的全身性炎症反应，最终导致多器官功能障碍以至死亡。肺脏是公认的较早发生功能障碍的器官。肺巨噬细胞包括分布在肺泡腔表面及肺泡腔内的肺泡巨噬细胞(alveolar macrophages，AMs)，分布在肺泡隔、支气管及血管旁的肺间质巨噬细胞(pulmonary interstitial macrophages，PIMs)和肺血管内的巨噬细胞。近来对PIMs研究的不断深入表明，在内毒素血症时PIMs较AMs更早受到LPS攻击，其吞噬功能、对补体的趋化作用及产生氧自由基的能力明显强于AMs，在肺组织炎症反应中起重要作用。因此，有效控制肺PIMs的过度激活将对减轻肺组织炎症反应起到积极的保护作用。体内一些神经肽／激素如生长激素、生长抑素、血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide，VIP)、降钙素基因相关肽、八肽胆囊收缩素(cholecystokinin octapeptide，CCK-8)、神经肽Y、神经加压素等具有一定的抗炎及抗休克作用，构成了神经-内分泌-免疫调节网络的重要物质基础。本室一直致力于研究CCK-8的抗内毒素休克(endotoxin shock，ES)及抗炎作用，用CCK-8预处理ES大鼠可使平均动脉压回升而肺动脉压降低，并明显减轻ES时肺脏、肝脏、脾脏、肾脏间质水肿及白细胞浸润等炎性病理损伤，降低死亡率。CCK-8缓解ES大鼠早期肺动脉高压的作用与其减轻肺脏炎症反应有关。但有关CCK-8的抗炎作用及其机制尚未完全阐明，仍存在许多问题亟待解决。我们的新近研究表明肺巨噬细胞存在CCK受体基因表达，并可被LPS诱导表达中文摘要增加，提示CCK七可能通过与其受体相互作用而干预LPS激活巨噬细胞的过程，从而调节炎症反应。 LPS介导巨噬细胞活化的信号通路错综复杂，但目前认为LPS一 CD14TLR4一IRAKIKKIKB－－am＊x－h了rolnfiammatory cytoklnes 是其中一条关键的信号通路，即LPS与巨噬细胞膜表面LPS受体CD14 结合后，激活 Toll样受体 4（TOll like receptor 4，TLR4）并与之结合形成受体复合物，募集适配分子 MyD88，MyD88的死亡结构域再募集下游的L－l受体相关激酶（IL－lreceptor－associated kinase，I肌）到受体复合物。IRAK随后发生自磷酸化，从受体复合物解离，募集’－’v－’受体相关因子 6（1’i－ receptor－associated factor 6，T附6），］顺次激活下游激酶，包括 W－h诱导激酶（W－h－inducing kinase NIK）和丝裂素活化蛋白激酶a皿激酶激酶（mitogen－activated Protein klnase亿RK kinase kinase，MEKKI）。激活的MK或MEKKI 都能独自激活I皿复合物，导致Ich磷酸化降解，NF－h移位入核，启动目的基因转录。因此本实验以体外培养的大鼠PIMS为对象，系统研究CCK8对 LPS作用下细胞内 LPS——CD14——TLR4－I－I皿一Ith一h一 prolnflammatory cytokines s条信号通路的影响，探讨 CCK七对 LPS诱导PIMS活化的作用及其信号通路，以揭示CCK七抑制LPS致肺组织炎症反应的作用机制。 ICCK－吕对LPS诱导大鼠肺间质巨噬细胞产生促炎因子及基因表达的影响应用胶原酶消化法结合肺泡耗竭灌洗和肺循环灌洗技术分离纯化 SD大鼠PIMS，在加入或不加人CCK七的情况下，用LPS刺激细胞一定时间，用ELISA7L检测细胞培养上清中TNF咀的含量，用RTPCR。” 技术分析细胞中 ’vmv咀及 ILl InRNA的表达。数据用王土s表示，用 SPSS统计分析软件进行统计学分析，各组均数的比较行单因素方差分析（ANOVA人用最小显著差法（leastsignifican differenCe，LSD）作两两比较，P＜O刀5为有显著性差异。结果显示：（）NMs自发性产生 IN17亿的量非常少，低于我们检测的下限。LPS lm叭孵育 PIMs 12 h 时，细胞上清中的 TNF心含量明显增多门66．61土 124．40 pg／ml， P＜0刀1）；CCK．8（10｛ mol／L－10－‘mol／L）可剂量依赖性地抑制 LPS诱 2 中文摘要导的 INF叱生成增多，10－‘mol／L CCK七轻微降低 LPS诱生的 INI7咀，但无统计学意义（497＊ 1士 132．25 pg／ffil， P＞0＊5），而 10－’mol几 CCK－8 抑制LPS诱导的T’i－－Q生成达44％（3 19＊士62．ZI pg／ffil，P＜0＊1）， 10“mol几 CCK－8抑镐率达刀％（16．99士63．49 p吻l，P＜0＊1），但仍明显高于对照组（P＜0刀5人＊＊卜8单独孵育对TNF心的生成无明显影响（P＞0刀5）。（2）LPS叭孵育 PIMs 3 h可导致细胞 1’i－’－a mRNA 表达明显增高（P＜O．01人而＊陀与＊＊义8共同孵育的NMs，其TNF咀＜ RNRNA表达水平明显低于＊＊S组，并呈剂量依
【学位单位】：河北医科大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2002
【中图分类】：R363

【参考文献】