与HSV-1感染相关的细胞立即早期基因产物HTRP在细胞辅抑制因子复合物中功能的分析

发布时间：2020-10-15 12:11

　　 病毒在感染细胞的过程中，病毒能在不同的复制时相以不同的方式与宿主细胞的多种组分发生相互作用。正是这种多层次相互作用导致了病毒对细胞感染的不同病理学结果。病毒和细胞表面相应受体的结合起始了病毒与细胞之间的相互作用，这个结合过程可以和正常生理配体一样使受体活化，并激活相应的信号传导成分，使病毒所携带的特定信号传入胞内。在这一层次的研究，将使我们认识病毒感染过程中的第一个步骤在病毒与细胞相互作用领域中的具体机理和意义。单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)是一种具有较强传染性的病原体，它是一种结构复杂的双链DNA病毒，对于HSV-1病毒结合受体所导致的细胞早期基因产物功能的分析，不仅能加深对HSV-1和细胞之间相互作用的理解，也有助于阐明细胞中未知功能蛋白的作用方式及其分子机理。 本研究的重点是分析HSV-1病毒感染KMB-17后诱导的差异基因htrp所编码蛋白HTRP(human transcription regulator protcill)在细胞内的功能意义。我们以病毒学、分子生物学等实验为基础，结合酵母双杂交、报告基因等研究方法，对HTRP的功能特性和其作用蛋白进行了初步的研究。通过对htrp基因的Northern杂交分析发现htrp基因在脑、心脏、肝、肺、脾、肾组织中均有表达，但在心脏组织中为低水平表达，并证实了htrp基因的表达与HSV-1的刺激作用有密切的关联。 通过观察HTRP—GFP融合蛋白在活细胞内的荧光分布确定了HTRP蛋白定位于胞核中，且在不同的细胞中HTRP蛋白的胞核定位并无差别；流式细胞仪分析的结果发现上调HTRP蛋白的表达能显著地诱导细胞死亡；GST pull-down实验发现了HTRP蛋白在胞内具有三个相互作用的蛋白，并通过酵母双杂交系统筛选和GST pull-down+免疫印记的方法证实了其中一个相互作用蛋白为辅抑制因子复合物mSin3A的组成成分之一SAP30；通过HTRP缺失体—EGFP融合蛋白转染实验，HTRP缺失体和SAP30相互作用的β-半乳糖苷酶分析确定HTRP蛋白分子
【学位单位】：中国协和医科大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2004
【中图分类】：R373
【部分图文】：

图1质粒pGE即一N2图谱Fig1StruetureofPGEFP一NZ图2质粒GPE--xsx一1图谱Fig2StruetureofPGEX一sx一I

2.人单纯疙疹病毒HSV一:医学生物学研究所病毒免疫室保存，培养并收获HPe一2细胞，蔗糖密度梯度离心纯化，滴度为1.0t‘CCIDos/ml。大肠杆菌菌株:EochDHS“医学生物学研究所病毒免疫室保存.基因型:SupE44△LaeU169(甲80LaeZ△M15)，hsdR17reeAIendAIgyrA96，thi一1re1AI。.EochBL21医学生物学研究所病毒免疫室保存。基因型:，FO川口兀hsds(ar一确少，卯I，比刃。3.质粒:克隆载体pMD18一T，宝生物公司;克隆载体UPC18，本实验室保存;表达载体pGEX一SX一1，peDNA3.0，pEGFpNZ，pGADT7，pGBKT7，pACTZ，pSVpgal等由本实验室保存。pSG424，sxGa14一TK一Lueiferase由HowardHughesMedi。alInstitute的DannyReinberg教授馈赠。

图3质粒沁KBT7图谱Fig3StruetureofPGBKT7.图4质粒pATCZ图谱Fig4StruetureofPACT2..图5质粒GPATD7图谱Fig5StruetureofGPATD7.图6质粒pSG424图谱Fig6StruetureofPGS424.
【参考文献】

相关期刊论文 前3条

1 刘龙丁,董承红,董少忠,王丽春,胡方,赵红玲,李琦涵;HSV-1感染细胞中HTRP基因的克隆及表达纯化[J];病毒学报;2003年01期

2 李琦涵,董承红,王炯,王丽春,孙明,杨芳;两种病毒与细胞结合诱导的原癌基因早期表达[J];生物化学与生物物理学报;2000年02期

3 王炯,刘龙丁,孙明,董承红,王丽春,王晶晶,李琦涵;在HSVI感染细胞中类PEBP蛋白基因的克隆及分析[J];中国病毒学;2002年02期

本文编号：2842155