淡色库蚊与骚扰库蚊触角嗅觉基因表达分析

发布时间：2020-10-20 05:44

　　 目的了解淡色库蚊与骚扰库蚊触角中差异性表达的嗅觉基因,为揭示二者遗传分化特征提供参考依据。方法分别设置淡色库蚊吸血前、后,骚扰库蚊吸血前、后等4个实验组。每组共设4个生物学重复样品,每个样品取20只蚊虫触角。采用TRIzol法提取各组样品总RNA,采用NEBNext Ultra TM RNA R文库构建试剂盒构建文库。对转录组基因进行测序,通过FPKM值差异性分析,筛选淡色库蚊与骚扰库蚊分别在吸血前、后表达差异显著的嗅觉基因,并进行实时荧光定量PCR (qRT-PCR)验证。结果淡色库蚊吸血前、后触角转录组共注释了50个气味结合蛋白(OBP)和31个气味受体(OR)基因,骚扰库蚊吸血前、后触角转录组共注释了36个OBP和12个OR。淡色库蚊吸血后较吸血前显著上调的OBP有4个,无显著下调的OBP。骚扰库蚊吸血后较吸血前显著上调和下调的OBP分别有3个。淡色库蚊吸血后较吸血前无显著上调的OR,显著下调的OR有3个。骚扰库蚊吸血后较吸血前无显著上调的OR,显著下调的OR有1个。qRT-PCR验证结果显示,淡色库蚊吸血后OBP17显著上调;骚扰库蚊吸血后OBP31、 OBP44表达量显著上调,其中OBP44与测序结果一致,OBP31与测序结果相反。吸血前,骚扰库蚊OBP17显著高于淡色库蚊;吸血后,骚扰库蚊OBP31、 OBP44显著高于淡色库蚊,OBP99a显著低于淡色库蚊。骚扰库蚊吸血后OR31、 OR65、 CPIJ001069表达量均显著上调,其中OR65和CPIJ001069表达量显著高于淡色库蚊(P 0.05)。淡色库蚊吸血后无显著变化的OR基因。结论淡色库蚊与骚扰库蚊的嗅觉基因OBP和OR表现出了进化分化,OBP17、 OBP44可能参与调控骚扰库蚊吸血后行为。OR31、OR65、 CPIJ001069可能参与调控骚扰库蚊吸血后行为。
【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 蚊虫来源
    1.2 主要试剂
    1.3 RNA提取
    1.4 文库构建
    1.5 生物信息学分析
    1.6 qRT-PCR检测
    1.7 统计学分析
    1.8 伦理批准和患者知情同意
2 结果
    2.1 OBP和OR基因表达量差异性分析
    2.2 OBP和OR基因qRT-PCR结果
3 讨论

【参考文献】

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【共引文献】

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【二级参考文献】

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本文编号：2848302