用无血清适应的Vero细胞培养H5N1型流感病毒条件的优化

发布时间：2017-06-25 11:05

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【摘要】：目的优化无血清适应的Vero细胞(SFM-Vero细胞)培养H5N1型流感病毒的条件。方法将H5N1型流感病毒接种于SFM-Vero细胞,于免疫荧光显微镜下观察病毒感染情况。对病毒无血清培养条件MOI(0.05、0.10、0.15、0.20)、细胞培养时间(12、24、36、48 h)、培养液基础培养基(DMEM/F12、M199、RPMI1640及MEM:DMEM/F12混合液)、培养温度(33、33.5、34、34.5、35和37℃)、收获时间(24、36、48、60和72 h)、培养液p H值(6.8、7.1、7.4、7.7、8.0和8.3)和TPCK胰酶浓度(0.5、1.0、1.5μg/ml)进行优化,并检测最佳条件无血清培养的H5N1型流感病毒的血凝效价及形态。结果 H5N1型流感病毒对SFM-Vero细胞具有感染性。最佳无血清培养条件为:MOI=0.1和0.15,细胞培养时间36 h,以DMEM/F12为基础培养基,病毒培养温度33.5和34.5℃,病毒收获时间60 h,培养液p H 7.7,TPCK胰酶浓度为1.0μg/ml。最佳条件无血清培养的H5N1型流感病毒的血凝效价为1∶512,电镜下观察病毒形态完整。结论确定了H5N1型流感病毒对SFM-Vero细胞具有感染性,并优化了SFMVero细胞培养流感病毒的适宜条件,为更具有生物安全性流感疫苗的研发奠定了基础。
【作者单位】： 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室;南开大学生命科学学院;
【关键词】： 无血清培养 Vero细胞 HN型流感病毒
【基金】：重大传染病专项(2013ZX10004003003) 科技部对俄合作专项(2011DFR30420) 国家863(2012AA02A404任务7)
【分类号】：R373.13
【正文快照】： 近年来,高致病性的禽流感病毒严重威胁公众健康[1]。据世界卫生组织报道,全球范围内感染H5N1型禽流感的496例患者中,有293人死亡[2]。目前,接种疫苗是预防高致病性的流感病毒感染最有效的手段。Vero细胞系是目前公认的可作为人用疫苗生产基质的细胞系之一[3],其可采用微载体发

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本文编号：481843