尿酸对人骨髓间充质干细胞成骨分化过程中Wnt信号通路的影响

发布时间：2017-07-17 11:09

  本文关键词：尿酸对人骨髓间充质干细胞成骨分化过程中Wnt信号通路的影响

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【摘要】：目的:探讨不同浓度尿酸对人骨髓间充质干细胞(h BMSCs)成骨细胞分化过程中对Wnt/β-catenin信号通路相关基因表达的影响。方法:采用全骨髓贴壁法体外分离培养健康成年人骨髓间充质干细胞,培养至第3代时选取生长状态良好的h BMSC作为研究对象。实验分为5组,为空白对照组及用含不同浓度尿酸(0,140,280,560μmol/L)的成骨诱导液进行成骨向诱导分化培养的实验组,倒置显微镜下观察细胞形态,于分化培养的第7天进行细胞碱性磷酸酶成骨鉴定染色及检测细胞成骨分化过程中碱性磷酸酶活性,第3天及第7天采用CCK-8法检测细胞增殖能力,最后于第10天检测利用荧光定量PCR法检测各组细胞中Wnt信号通路中Wnt-3α,β-catenin m RNA的表达,结果进行统计学分析。结果:倒置显微镜下观察可见大量贴壁的细胞团簇,形态多呈纺锤形、梭形,第7天左右可见已全部贴壁,呈典型的集落样生长,各实验组组细胞碱性磷酸酶染色为阳性,且随尿酸浓度增高,染色依次加深。尿酸干预后各实验组细胞中碱性磷酸酶活性以及细胞的增殖能力较对照组明显增高。同时细胞内Wnt3a、β-cateninm RNA也较对照组表达增强,并与干预尿酸浓度升高成正相关,实验组与对照组间各实验指标比较以及实验组各组数据间间进行统计学分析比较,P0.05,表明差别均有显著性意义。结论:尿酸可以促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,其机制可能为上调Wnt/β-catenin信号通路相关基因表达实现。
【关键词】：干细胞 尿酸 人骨髓间充质干细胞 成骨分化 Wnt信号通路
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R580
【目录】：

• 摘要2-3
• Abstract3-5
• 引言5-6
• 第一章 实验材料与方法6-13
• 1.1 实验设计和材料6-7
• 1.2 配置试剂7-8
• 1.3 实验操作方法8-13
• 第二章 统计分析13-14
• 第三章 实验结果14-19
• 3.1 h BMSCs的细胞形态14-15
• 3.2 h BMSCs向成骨细胞分化后碱性磷酸酶染色鉴定结果15-16
• 3.3 h BMSCs向成骨细胞分化后碱性磷酸酶活性鉴定结果16
• 3.4 干预后h BMSCs向成骨细胞分化增值率测定16-17
• 3.5 RT-PCR检测各组Wnt-3a、β-catenin m RNA表达水平17-19
• 第四章 讨论19-21
• 结论21-22
• 参考文献22-25
• 综述25-35
• 综述参考文献31-35
• 攻读学位期间的研究成果35-36
• 致谢36-37

【参考文献】

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本文编号：553286