VEGF165过表达对BMP2成骨细胞分化影响的实验研究

发布时间：2017-07-17 12:01

  本文关键词：VEGF165过表达对BMP2成骨细胞分化影响的实验研究

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【摘要】：[目的]探讨腺病毒转染血管内皮生长因子165(vascular endothelial growth factor 165,VEGF165)对骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein 2,BMP2)促成骨细胞分化的抑制性作用研究。[方法]采用密度梯度离心法分离兔骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),取第3代BMSCs进行细胞表型鉴定并作为细胞实验对象,使用Ad-BMP2和Ad-BMP2-VEGF165载体体外转染BMSCs,倒置荧光显微镜下观察GFP表达变化;同时ELISA和Western blot检测BMP2和VEGF165蛋白的表达。然后,应用成骨细胞诱导培养液定向诱导BMSCs向成骨细胞分化。实验分3组:Ad-BMP2-VEGF165转染BMSCs组(Ad-BMP2-VEGF165组),AdBMP2转染BMSCs组(Ad-BMP2组),BMSCs组(对照组)。分别在成骨细胞诱导培养后7、14、21 d,通过Real-time PCR分析ALP和OC mRNA相对表达水平和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性测定、骨钙素(Osteocalcin,OC)免疫组化染色来评价各组BMSCs成骨分化潜能的影响。[结果]第3代细胞表面高表达CD29(99.82%)、CD44(94.14%),低表达CD14(3.11%)、CD34(0.34%);腺病毒转染后第5 h BMP2和h VEGF165蛋白水平表达最高;成骨细胞诱导培养14和21 d后,Ad-BMP2组成骨相关基因表达、OC免疫组化和ALP活性表达最高,结果与其他两组相比较差异具有统计学意义(P0.05);而对照组表达最弱,与Ad-BMP2-VEGF165组比较差异具有统计学意义(P0.05)。[结论]腺病毒载体Ad-BMP2与Ad-BMP2-VEGF165转染BMSCs后,均具有明显促进BMSCs体外诱导成骨细胞分化潜能,但Ad-BMP2诱导作用更为显著,同时说明VEGF165可能对BMSCs成骨细胞分化起抑制作用。
【作者单位】： 新乡医学院研究生院;济宁医学院附属医院脊柱外科;
【关键词】： 骨形态发生蛋白 血管内皮舒张因子 骨髓间充质干细胞 成骨细胞 腺病毒载体
【基金】：山东省自然科学基金项目(编号:ZR2010HM090) 山东省高等学校科技计划项目(编号:J14LL04)
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 创伤、感染、肿瘤等因素造成的骨缺损是困扰骨科医生的难题,如何加快骨缺损的修复是当前骨科医生面临的挑战[1]。近年来,随着基因工程和组织工程技术发展,通过干细胞表达外源生长因子基因复合生物支架材料体外构建组织工程化人工骨,为临床治疗骨缺损提供了新的思路。BMSCs具有

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 杨治;朱养均;何鹏;张银刚;;体外负压培养对人BMSCs BMP-2、VEGF mRNA表达水平的影响[J];中国矫形外科杂志;2011年17期

2 丁立峰;周振东;杨军;郑刚;李建军;;骨形态发生蛋白2基因转染的兔骨髓间充质干细胞复合聚乳酸-聚己内酯支架体外构建载基因仿生骨的实验研究[J];中国矫形外科杂志;2013年09期

3 Tao Wang;Tian-An Liao;Shao-Bo Zhong;;Transfection of bone marrow mesenchymal stem cells using green fluorescence protein labeled hVEGF165 recombinant plasmid mediated by liposome[J];Asian Pacific Journal of Tropical Medicine;2013年09期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 卢志华;王韶进;马育栋;赵冬梅;;羟基磷灰石/羧甲基壳聚糖组织工程骨的制备及表征[J];材料导报;2013年16期

2 汪小华;魏富达;喻胜鹏;李伟;黄科;董世武;谢肇;;骨诱导膜活化灭活骨修复骨缺损的实验研究[J];第三军医大学学报;2014年20期

3 唐弈遥;周诺;;基因修饰在牵张成骨的研究进展[J];口腔颌面外科杂志;2014年05期

4 王璐;刘傥;张祥洪;张湘生;;骨形态发生蛋白2在人骨不连组织中的表达及其临床意义[J];中南大学学报(医学版);2014年10期

5 杨治;姚建锋;许鹏;马建兵;张育民;刘林;许珂;张银刚;;体内负压技术对家兔颅骨修复及BMP-2 mRNA表达水平的影响[J];中国矫形外科杂志;2013年17期

6 王雷;余德涛;;引导性骨再生膜管治疗骨缺损:怎样更好的走向临床?[J];中国组织工程研究;2013年42期

7 孙立国;李宏国;范宏斌;;骨髓间充质干细胞基因转染应用的研究进展[J];中国矫形外科杂志;2014年01期

8 马立坤;叶鹏;黄文良;田仁元;邓江;;骨形态发生蛋白2/聚乳酸缓释微球的制备及表征[J];中国组织工程研究;2014年03期

9 张杰;马会杰;崔军;孟范勇;侯加法;;脂质体介导RNA干扰质粒转染鸡成骨细胞条件的优化[J];畜牧与兽医;2014年06期

10 林凤飞;郑明;刘伯龄;汪强;林朝辉;;多孔钽金属与成骨细胞生物相容性的实验研究[J];中国矫形外科杂志;2014年12期

中国博士学位论文全文数据库 前7条

1 吴凯;BMP-2和BMSCs结合n-HA/n-LDIG复合材料修复兔桡骨缺损的实验研究[D];中南大学;2013年

2 侯洋;P15蛋白促进骨形成及其作用机制的实验研究[D];第二军医大学;2013年

3 徐佳;下颌骨外板劈开珊瑚羟基磷灰石植入治疗半侧颜面短小的基础与临床研究[D];北京协和医学院;2014年

4 杨明;VEGF165、BMP4基因复合生物活性玻璃组织工程骨的构建及修复骨缺损的研究[D];中南大学;2013年

5 刘守应;羊同种异体松质冻干骨生物学行为的实验研究[D];中国人民解放军医学院;2014年

6 胡颖;稀土元素铈对骨髓间充质干细胞成骨作用影响的实验研究[D];山东大学;2014年

7 解琛;髓内腓骨移植结合Ilizarov技术治疗骨不连的实验及临床研究[D];第二军医大学;2014年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 王奔;药物预防绝经后骨质疏松症妇女脆性骨折的meta分析[D];天津医科大学;2013年

2 杜静;BMPs信号通路在压力调控BMSCs/PRF双膜复合体成软骨响应中作用的研究[D];第四军医大学;2013年

3 林昭伟;BMP2和VEGF165在诱导大鼠骨髓间充质干细胞成骨再生中的作用[D];南方医科大学;2013年

4 雷鹏飞;异种骨移植材料修复兔桡骨缺损的免疫学研究[D];中南大学;2013年

5 王晶;经肋间动脉移植骨髓基质细胞治疗脊髓损伤的实验研究[D];南方医科大学;2014年

6 张美光;负压封闭引流联合含氧液冲洗治疗慢性创面的临床研究[D];南方医科大学;2014年

7 于保军;间断性牵张力经由p38MAPK-Osterix信号通路促进小鼠BMSCs成骨向分化[D];青岛大学;2014年

8 李多玉;兔骨髓间充质干细胞联合geneX/TGF-β2体外培养成骨分化的实验研究[D];昆明医科大学;2014年

9 曾庆忠;uPA和VEGF165单基因真核质粒共转染人脐静脉内皮细胞对细胞增殖的影响[D];南昌大学;2014年

10 涂以济;藻酸锶凝胶的理化性质及其复合兔骨髓间充质干细胞体外三维培养的实验研究[D];南昌大学;2014年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前9条

1 郝伟;胡蕴玉;姜明;吕荣;王军;赵廷宝;;基于脂肪干细胞I型胶原凝胶PLGA-β-TCP支架的新型仿生骨组织工程复合体的构建及生物学性能[J];第四军医大学学报;2008年07期

2 娄鸣;李晓红;饶国洲;;BMP-2,BGP mRNA表达量及ALP活性的变化对大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导成骨细胞的影响[J];现代检验医学杂志;2008年05期

3 郭洪刚;刘静;刘海峰;Yong Soon Chiong;;携载人重组骨形态形成蛋白2及脂肪基质细胞的仿生骨膜构建及强化兔桡骨的再生能力[J];中国组织工程研究与临床康复;2007年48期

4 陈建洪;唐倩;田词;梁焕友;陈晓峰;吴刚;;新型纳米仿生骨植入材料的生物相容性(英文)[J];中国组织工程研究与临床康复;2009年29期

5 柴岗,张艳,刘伟,崔磊,曹谊林;组织工程骨在颅颌面骨缺损临床修复中的应用[J];中华医学杂志;2003年19期

6 李亚非,李青,马福成,陈万录,刘新平;兔骨折骨痂中骨形态发生蛋白和成纤维细胞生长因子基因的表达[J];中华医学杂志;1996年08期

7 黎润光;邵景范;魏明发;;机械牵张应力对成骨细胞的影响研究进展[J];中国矫形外科杂志;2006年06期

8 黎润光;邵景范;魏明发;赵东明;王钢;陈滨;任高宏;;维拉帕米在应力对体外骨髓间充质干细胞早期反应基因蛋白表达中作用的研究[J];中国矫形外科杂志;2009年08期

9 张明磊;常非;高忠礼;柳扬;刘光耀;;BMP-2重组质粒转染骨髓间充质干细胞及表达的检测[J];中国实验诊断学;2010年11期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 易诚青;核连接因子家族调控成骨细胞分化的分子机制[J];国外医学(创伤与外科基本问题分册);2000年02期

2 张本斯,李健,王凡;骨形态发生蛋白、豪猪蛋白和核连接因子α1对成骨细胞分化的调节[J];四川解剖学杂志;2002年03期

3 高建清;庄素新;张柳;陈雷;;辛伐他丁大鼠体内给药能否促进成骨细胞分化繁殖的探讨[J];海峡药学;2009年12期

4 陈允嘉;王豫蓉;邹林洪;李闻颖;郑雷蕾;吴艳;李艳;;放线共生放线杆菌培养上清对成骨细胞分化及间隙连接通讯的影响[J];第三军医大学学报;2010年10期

5 张怡元;林煜;冯尔宥;肖莉莉;陈嵘;王武炼;;钽微粒对人成骨细胞分化影响的实验[J];厦门大学学报(自然科学版);2013年04期

6 黄国平;郑强;杨金凤;郭春娟;沈丹;石东燕;徐玉林;潘志军;王金福;;模拟微重力对人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化中细胞信号通路影响的分析[J];空间科学学报;2008年01期

7 余向前;张柳;;Osterix对成骨细胞分化影响的研究进展[J];华北煤炭医学院学报;2007年01期

8 王国红,李祺福;Cbfa1/Runx2与成骨细胞分化调控[J];生命科学;2005年01期

9 谢幼专;朱振安;;物理因素诱导干细胞向成骨细胞分化研究进展[J];国际骨科学杂志;2006年01期

10 唐开,党耕町,郭昭庆;间断流体力学对骨髓基质来源的成骨细胞分化及功能的影响[J];中华医学杂志;2002年10期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 陈苗;沈悌;曲强;;人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化过程中表型变化研究[A];中华医学会第八次全国血液学学术会议论文汇编[C];2004年

2 贺捷;何悦;邱蔚六;竺涵光;;放射线对成骨细胞分化相关基因影响的研究[A];第八次全国口腔颌面—头颈肿瘤会议论文汇编[C];2009年

3 李帅;陈华;张金超;李小六;;香豆素类化合物对成骨细胞分化、矿化的影响[A];中国化学会第28届学术年会第6分会场摘要集[C];2012年

4 曲强;万新海;陈翠珠;;转录因子cbfal在骨髓干细胞向成骨细胞分化过程中的表达[A];第八届全国骨质疏松年会暨第五届全国钙剂年会会议文集[C];2002年

5 葛成;杨连甲;刘宝林;张志光;;PKA信号途径对成骨细胞分化成骨的作用[A];2004年中国口腔颌面修复重建外科学术会议论文汇编[C];2004年

6 薛鹏;吴学伦;周立新;李萌;马剑侠;王燕;李玉坤;;胰岛素样生长因子1通过上调TAZ表达促进大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化[A];中华医学会第七次全国骨质疏松和骨矿盐疾病学术会议论文汇编[C];2013年

7 卢瑛;;Apelin抑制血管平滑肌细胞向成骨细胞分化[A];中华医学会第六次全国骨质疏松和骨矿盐疾病学术会议暨中华医学会骨质疏松和骨矿盐疾病分会成立十周年论文汇编[C];2011年

8 石东燕;孟芮;袁文佶;刘立跃;宗晨;骞爱荣;商澎;王金福;;强磁模拟的微重力对人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的影响[A];中国空间科学学会第七次学术年会会议手册及文集[C];2009年

9 王金凤;徐小雅;丁巧灵;周轶;金慰芳;王洪复;高建军;;FGF23基因沉默对PTH促成骨细胞分化作用的影响[A];中华医学会第五次中青年骨质疏松和骨矿盐疾病学术会议论文集[C];2013年

10 张晓玲;戴\戎;汤亭亭;张超;周光炎;;未分化及向成骨细胞分化的骨髓间充质干细胞的免疫学特性研究[A];2005年上海市生物医学工程学会学术年会论文集[C];2005年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 陈小三;调控成骨细胞分化的信号转导通路研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年

2 张科强;冲击波诱导人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的机制[D];吉林大学;2008年

3 李文锋;炎症对骨折愈合过程中成骨细胞分化的影响及分子机制[D];南方医科大学;2010年

4 张伟;牛源乳铁蛋白促进成骨细胞分化的信号转导机制[D];中国农业大学;2014年

5 张燕;DDR2在成骨细胞分化过程中的作用研究[D];第四军医大学;2010年

6 张璇;柚皮甙诱导人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的实验研究[D];中南大学;2006年

7 赵红斌;应变对间充质干细胞向成骨细胞分化的力学响应机制研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2006年

8 李辉;一个新的调节成骨细胞分化的microRNA的克隆及其功能研究[D];中南大学;2010年

9 秦炜炜;模拟失重条件下microRNA-494抑制成骨细胞分化作用机制的研究[D];第四军医大学;2010年

10 侯旭;ODN MT01通过MAPK通路调控成骨细胞分化的机制研究[D];吉林大学;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 王宝刚;冲击波诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的研究[D];吉林大学;2007年

2 姜晴;组蛋白去乙酰化酶4在成骨细胞分化中作用的初步探究[D];东北师范大学;2011年

3 李巍;碱性成纤维细胞生长因子对兔骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化影响的研究[D];广西医科大学;2011年

4 王金凤;内源性FGF23对PTH促成骨细胞分化作用的影响[D];复旦大学;2013年

5 李玉姗;Sirt2对成骨细胞分化的影响[D];东北师范大学;2012年

6 简静;毛蕊异黄酮葡糖苷通过BMP/Wnt信号通路促进ST2细胞向成骨细胞分化[D];湖北大学;2014年

7 林煜;健骨颗粒对成骨细胞分化影响的实验研究[D];福建中医学院;2009年

8 陈允嘉;放线共生放线杆菌培养上清对成骨细胞分化及间隙连接通讯的影响[D];重庆医科大学;2010年

9 秦斐;亚硒酸钠抑制黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶诱导血管平滑肌细胞向成骨细胞分化的机理研究[D];华中科技大学;2012年

10 万惷;小鼠成骨细胞分化中表达上调长链非编码RNA的鉴定[D];中南大学;2014年

，

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