去乙酰化酶SirT1参与AIF介导的细胞凋亡

发布时间：2017-07-18 01:22

  本文关键词：去乙酰化酶SirT1参与AIF介导的细胞凋亡

  更多相关文章： AIF SirT1 去乙酰化 蛋白纯化 凝胶阻滞

【摘要】：凋亡诱导因子AIF是一类进化上高度保守的黄素蛋白。正常情况下,AIF定位在细胞的线粒体内膜,能催化电子在细胞色素C与NAD之间的传递,发挥氧化还原酶的功能；当细胞受到凋亡信号的刺激时,AIF被钙蛋白酶从线粒体内膜切下,释放进入胞质,通过其N端的核定位序列转位进入细胞核,在细胞核中,AIF可直接与DNA结合,与亲环蛋白A (CypA)及H2AX共同作用引起染色质凝集和DNA的大片段化,从而导致细胞凋亡。AIF引起的细胞凋亡是caspase非依赖的,用caspase的广谱抑制剂Z-VAD fmk等均不能抑制AIF引起的细胞凋亡。目前针对AIF从线粒体释放入胞质并转位进入细胞核的机制有较清楚的研究,但是对AIF进入细胞核后如何介导染色质凝集及DNA降解的机制研究的还不够透彻。我们通过质谱数据发现了AIF的一种新的结合蛋白一一SirT1。SirT1是一种NAD+依赖的蛋白去乙酰化酶类,能够与多条信号转导通路中的蛋白相互作用,通过对生物体内的赖氨酸残基、组蛋白、转录因子等进行去乙酰化,参与细胞周期调控、细胞衰老凋亡、神经保护、胰岛素分泌、糖脂类代谢、炎症氧化应激反应、血管生成等过程,行使其对基因的调控功能。为了进一步研究AIF与SirT1的相互作用,我们进行了细胞内与体外实验两方面的探索。在本课题中,我们通过原核表达系统纯化的GST标签蛋白与His标签蛋白,证明AIF与SirT1能够在体外直接结合。并且,我们在体内实验中证明了AIF存在乙酰化修饰且SirT1能够对其进行去乙酰化,并发现AIF的K295位是其主要的乙酰化位点。此外,通过凝胶阻滞实验,我们发现SirT1对AIF功能的影响并不是通过去乙酰化AIF来影响AIF与DNA的结合能力,而是通过影响AIF与CypA的结合,从而抑制AIF行使诱导凋亡的功能。本论文的实验结果主要通过体外的生化及功能性实验为体内研究AIF与SirT1的相互作用补充,同时,为AIF的翻译后修饰研究揭开序幕,对深入研究AIF入核后行使凋亡的机制提供了依据。
【关键词】：AIF SirT1 去乙酰化 蛋白纯化 凝胶阻滞
【学位授予单位】：华东师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 中文摘要6-7
• Abstract7-9
• 文献综述9-16
• 第一章 SirT1蛋白与AIF蛋白结合的发现16-29
• 一、实验材料、试剂与仪器16-20
• 二、实验方法20-25
• 三、结果与分析25-27
• 四、本章小结27-29
• 第二章 凋亡诱导刺激下AIF与SirT1相互作用的研究29-36
• 一、实验材料、试剂与仪器29
• 二、实验方法29
• 三、结果与分析29-34
• 四、本章小结34-36
• 第三章 SirT1与AIF相关蛋白的体外纯化及体外结合的研究36-58
• 一、实验材料、试剂与仪器36-41
• 二、实验方法41-50
• 三、结果与分析50-55
• 四、本章小结55-58
• 第四章 体外探究SirT1影响AIF功能的途径58-64
• 一、实验材料、试剂与仪器58
• 二、实验方法58-59
• 三、结果与分析59-62
• 四、本章小结62-64
• 讨论64-66
• (参与课题) KAP1473位磷酸化响应DNA损伤应激条件下的机制的研究66-72
• 前言66-67
• 一、实验材料、试剂、与仪器67
• 二、实验方法67-68
• 三、实验结果68-70
• 四、讨论70-72
• 附录Ⅰ72-73
• 附录Ⅱ73-74
• 参考文献74-78
• 致谢78-79

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 任智;细胞凋亡的研究现状[J];四川师范学院学报(自然科学版);2000年04期

2 罗琦,王建华,王远亮,潘君;金属离子在细胞凋亡中的调控作用[J];重庆大学学报(自然科学版);2003年08期

3 方晓阳,盛伟;细胞凋亡的概念来源及其研究进展[J];生命的化学;2003年02期

4 田辉凯,姚小皓,李学军;非细胞体系在细胞凋亡中的应用[J];生命的化学;2003年02期

5 叶玲玲,陈昭烈;动物细胞大规模培养过程中细胞凋亡的检测与控制[J];中国生物工程杂志;2003年08期

6 龙泉,邢婉丽;Jurkat细胞凋亡的实时电旋转芯片检测[J];生物物理学报;2005年01期

7 杨竹林,伍汉文;细胞凋亡调控因素有关基因的研究[J];国外医学(生理、病理科学与临床分册);1997年02期

8 刘恩梅,杨锡强;细胞凋亡及其影响因素[J];重庆医学;1998年01期

9 金梅林,陈焕春;细胞凋亡及基因调控在兽医病毒学领域研究动态[J];动物医学进展;2000年04期

10 何静妹;细胞的自杀行为——细胞凋亡[J];邯郸医学高等专科学校学报;2000年05期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 陈颖丽;李前忠;;不同亚细胞位置的细胞凋亡蛋白质的结构特性分析[A];第十一次中国生物物理学术大会暨第九届全国会员代表大会摘要集[C];2009年

2 孙英丽;赵允;朱山;翟中和;;植物细胞凋亡及其机理的研究[A];中国细胞生物学学会第七次会议论文摘要汇编[C];1999年

3 刘二龙;袁慧;;锌与细胞凋亡[A];2003全国家畜内科学学术研讨会论文专辑[C];2003年

4 邱洁;高海青;;锌在细胞凋亡中的作用研究进展[A];山东省微量元素科学研究会第三届学术研讨会论文汇编[C];2006年

5 俞雅萍;;细胞凋亡的机制及途径和影响因素[A];华东六省一市生物化学与分子生物学学会2006年学术交流会论文集[C];2006年

6 于青;袁伟杰;姚建;;晚期糖基化终末产物引起足细胞凋亡的机制[A];2007年浙沪两地肾脏病学术年会资料汇编[C];2007年

7 季宇彬;尹立;汲晨锋;;调控细胞凋亡的线粒体因素[A];肿瘤病因学研究与中西医结合肿瘤综合诊疗交流研讨会论文集[C];2009年

8 吴经纬;汤长发;;运动中细胞凋亡的线粒体变化特征[A];湖南省生理科学会2006年度学术年会论文摘要汇编[C];2007年

9 蒲小平;李长龄;屠鹏飞;宋志宏;;中药肉丛蓉成分抗神经细胞凋亡的实验研究[A];第七届全国生化药理学术讨论会论文摘要集[C];2000年

10 江键;宋诚荣;崔黎丽;方影;王小平;;静电场对细胞凋亡作用的初步探讨[A];中国物理学会第九届静电学术年会论文集[C];2000年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 商东;“细胞凋亡”与临床医学[N];中国医药报;2001年

2 张志军;细胞凋亡与中医药[N];中国医药报;2002年

3 ;“细胞凋亡疗法”正逐步成为治疗癌症的新途径[N];中国高新技术产业导报;2002年

4 记者张建松;治疗癌症新途径：细胞凋亡疗法[N];科技日报;2002年

5 李明辉;“细胞凋亡”治癌症[N];医药导报;2002年

6 洪敏;细胞凋亡研究引人关注[N];中国医药报;2008年

7 陶春祥;细胞凋亡对心脏疾病的影响[N];中国医药报;2003年

8 本报实习记者 梁媛媛;薛定：发现癌症“开关”[N];北京科技报;2010年

9 高书明;诱导癌细胞凋亡[N];中国医药报;2004年

10 勇汇;中药诱导癌细胞凋亡研究进展[N];中国医药报;2002年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 杨利;系列多氮类化合物的抗肿瘤活性研究[D];武汉大学;2012年

2 张浩;从分子、细胞和动物水平研究铅诱发氧化损伤及细胞凋亡的效应与机理[D];山东大学;2015年

3 何欣怡;家蚕微孢子虫（Nosema bombycis）抑制家蚕BmN细胞凋亡的功能研究[D];浙江大学;2015年

4 冯全服;从线粒体途径研究川芎嗪诱导HepG2细胞凋亡效应机制[D];南京中医药大学;2015年

5 张晓倩;高糖诱导Bim蛋白高表达而促肾近曲小管上皮细胞凋亡的机制探讨[D];山东大学;2015年

6 孙健玮;PTEN基因负调控Raf1磷酸化的作用及其对PC3细胞凋亡的影响[D];昆明医科大学;2014年

7 徐林艳;肿瘤细胞凋亡过程中TNFRSF10B和CFLAR调控机制研究[D];山东大学;2015年

8 樊庆端;生物调控网络的建模与动力学行为研究[D];上海大学;2015年

9 王德选;WNK_3对钠氯协调转运子的调节及在胚肾细胞凋亡中的保护作用[D];南方医科大学;2015年

10 叶嘉;Nogo-B在急性肺损伤肺泡上皮细胞凋亡中的作用[D];第二军医大学;2015年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 安璐;3-氯-1,2-丙二醇细胞毒性及其诱导HEK293细胞凋亡途径探究[D];江南大学;2015年

2 杨翔;Procaspase-8的异常表达抑制TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡[D];昆明理工大学;2015年

3 张昌明;I3C通过调控p53泛素化对喉癌Hep-2细胞凋亡的影响[D];延边大学;2015年

4 彭涵;共轭亚油酸对仔猪脂肪细胞凋亡的影响[D];西南大学;2015年

5 李立辉;ΔFosB通过MMP-9调控山羊乳腺上皮细胞凋亡的分子机制[D];西北农林科技大学;2015年

6 杨鑫铖;Hedgehog信号通路在大鼠急性胰腺炎腺泡细胞凋亡中的作用[D];河北医科大学;2015年

7 贾琼琼;MicroRNA-214对H_2O_2损伤L6骨骼肌成肌细胞增殖和凋亡的影响[D];河北医科大学;2015年

8 王海莹;不同浓度17β-雌二醇对IL-1β诱导的大鼠纤维环细胞凋亡的影响[D];河北医科大学;2015年

9 王怡;地西他滨对Jurkat细胞增殖、凋亡及TAL1基因表达的影响[D];郑州大学;2015年

10 张文明;抗肿瘤活性物质的筛选及其抗肿瘤机制的研究[D];西南交通大学;2015年

，

本文编号：555437