新型恶性疟原虫（Plasmodium falciparum）基因表达平台的建立

发布时间：2017-07-28 18:22

  本文关键词：新型恶性疟原虫（Plasmodium falciparum）基因表达平台的建立

  更多相关文章： GIMO 质粒构建 体外培养 药物筛选 转染

【摘要】：疟疾是世界上最严重的感染性疾病之一,一直以来都威胁着人类健康,其中恶性疟原虫所导致的危害最为严重。随着分子生物学技术的不断发展,对于疟原虫的相关研究也日益深入,尤其疟原虫基因及其编码蛋白功能的揭示为疟疾防治提供了新的思路。而通常用于研究的基因外源表达体系均因为恶性疟原虫基因组中高AT含量产生的密码子偏爱性、包涵体形成等原因,使恶性疟基因体外表达困难重重。 2011年,荷兰莱顿大学Shahid Khan教授课题组成功建立了GIMO体系,为恶性疟原虫基因的表达与修饰提供了一个崭新平台。本实验中所用目的基因pfmif与pfmag-1是由本实验室保存的恶性疟原虫基因,前期已对其做到过深入研究,证明二者均在恶性疟原虫引起的免疫反应及其与宿主间相互作用中发挥重要作用,但对于全长pfmag-1基因的表达却一直没有成功,因此,本研究试图以较好表达的pfmif基因作为技术对照,通过表达pfmif和pfmag-1全长基因在本实验室建立GIMO技术平台系统,为深入研究疟原虫的生物学特性奠定实验基础。实验中首先通过酶切插入法重新构建质粒mif-1628、mag-1-1628,其次通过优化伯氏疟原虫体外培养方法,提高了成熟裂殖体含量的基础上避免了游离裂殖子的流失,并缩短了实验周期。同时,改进了药物筛选方法,将GIMo体系中腹腔注射的用药方式(注射剂量为0.4g/kg·day)转变为饮用水用药(1.5mg/mL),相对于原方法成功抑制了野生型伯氏疟原虫的生长,更有利于目的整合虫株的筛选。 综上所述,本实验中成功构建了包含外源基因的目的质粒,并优化了伯氏疟原虫体外培养与药物筛选方法,为今后的实验奠定了良好基础,此外,后期的转染实验仍在继续。
【关键词】：GIMO 质粒构建 体外培养 药物筛选 转染
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R382.31
【目录】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-6
• 前言6-9
• 实验材料9-17
• 一、实验试剂9-13
• 二、主要仪器设备13-14
• 三、主要分析软件14
• 四、主要溶液配制14-17
• 实验方法17-35
• 一、常用的分子生物学方法17-24
• 二、疟原虫培养24-28
• 三、转染28-34
• 实验流程图34-35
• 实验结果35-61
• 第一部分 伯氏疟原虫Pb1596以及目标质粒pL1628的鉴定35-39
• 第二部分 外源基因的鉴定及载体构建39-49
• 第三部分 目的质粒转染伯氏疟原虫Pb1596条件的初步探究49-57
• 第四部分 体外培养疟原虫方法的优化57-60
• 第五部分 药物筛选方法的改进60-61
• 讨论61-65
• 小结65-66
• 参考文献66-70
• 附录70-73
• 致谢73-74

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 陈俊;缪军;刘忠湘;李淑梅;薛采芳;;恶性疟原虫顶端膜抗原1基因转染伯氏疟原虫模型的建立[J];第四军医大学学报;2006年19期

2 罗竞红;游自立;;巴斯德毕赤酵母表达系统在外源基因表达中的研究进展[J];生物技术通报;2007年03期

3 叶苓,余新炳,徐劲;恶性疟原虫热休克蛋白86(HSP86)基因置换型和插入型打靶载体的构建[J];中国人兽共患病杂志;2000年06期

，

本文编号：585404