酶标仪快速测定大鼠、小鼠精子密度的方法研究

发布时间：2017-07-30 03:14

  本文关键词：酶标仪快速测定大鼠、小鼠精子密度的方法研究

  更多相关文章： 精子密度 吸光度 SD大鼠 KM小鼠 少精模型

【摘要】：目的利用酶标仪建立一种快速、准确的测定大、小鼠精子密度的方法。方法 1最适波长确立与回归方程建立:雄性KM小鼠和SD大鼠各6只,脱颈椎处死后分离左侧附睾,于PBS内充分剪碎,水浴充分游离精子,用酶标仪分别在300、380、450、530、600 nm下测定吸光度,拟合吸光度曲线,取相关系数最接近于1及标准差最小的为最佳波长;取KM小鼠、SD大鼠各10只,乙醚过量麻醉致死后用PBS稀释得到4、8、16、36倍的精子悬液,用酶标仪检测吸光度并使用细胞计数板对样品进行计数,以精子密度为横坐标及吸光度为纵坐标建立回归方程。2精子吸光度稳定性检测:KM小鼠和SD大鼠各6只,乙醚过量麻醉致死后制备左侧附睾悬液,样品置于室温(25℃)或继续37℃水浴,并于水浴后的0、20、30、40、50、60 min,取样品测定吸光度,记录样品的吸光度变化。3回归方程验证:使用20%乙醇灌胃30 d造KM小鼠少精症模型,采用吸光度-精子密度曲线方程及细胞计数板计数2种方法测定造模KM小鼠精子密度,验证新方法。结果确立KM小鼠、SD大鼠吸光度-精子密度曲线在380 nm处可以建立最适回归方程,KM小鼠精子密度x1与吸光度y1的关系为线性函数,线性回归方程为y1=2×10-9x1+0.0648,R2=0.9743;SD大鼠精子密度x2与吸光度y2的关系为线性函数,线性回归方程为y2=5×10-9x2+0.0621,R2=0.9940;SD大鼠精子悬液在水浴60 min后,A值与0 min时相比显著减低(P0.05),但在常温下40 min后显著升高(P0.05);KM小鼠精子悬液在水浴和常温条件下50 min后,与0 min时相比,A值显著升高(P0.05);与正常对照组相比,用酶标仪检测和标准曲线计算的乙醇少精组的精子密度均显著下降(P0.05);与标准曲线计算相比,通过细胞计数板方法检测乙醇少精组的精子密度没有显著变化。吸光度-精子密度曲线方程法可有效检测出少精症动物模型精子密度的减少。结论利用酶标仪建立吸光度-精子密度曲线方程法可以快速、准确的测定KM小鼠和SD大鼠的精子密度。
【作者单位】： 广州中医药大学中药学院;
【关键词】： 精子密度 吸光度 SD大鼠 KM小鼠 少精模型
【分类号】：R-33
【正文快照】： 在大鼠、小鼠实验指标和养殖过程中,测定其精子密度极为普遍。目前常用的测定方法有血球计数法[1]、流式细胞仪法[2]和分光光度法[3]。其中血球计数法在处理大量样品时显得繁琐和低效,流式细胞仪法处理繁琐,费用高;而分光光度法具有操作简单,费用便宜等优点;酶标仪所运用的技

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本文编号：592267