冰冻切片法观察不脱钙骨组织的荧光分布

发布时间：2017-08-08 09:27

  本文关键词：冰冻切片法观察不脱钙骨组织的荧光分布

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【摘要】：目的介绍一种不脱钙骨组织的冰冻切片法,通过观察骨和软骨内的荧光分布,探讨该方法的可行性。方法取健康成年雄性绿色荧光蛋白转基因SD大鼠膝关节,经包埋剂包埋,置于冰冻切片机中,将表面涂有合成橡胶的薄膜黏附于包埋块表面,行膝关节组织切片。荧光显微镜及光镜下观察切片组织内荧光表达及结构;并行Ⅰ、Ⅱ型胶原免疫荧光染色和HE、甲苯胺蓝、茜素红染色,观察软骨及骨的结构及荧光分布特征。结果制备的大鼠膝关节冰冻切片厚度均为6μm,大体观察示关节各结构均完整切割,光镜下能清晰分辨切片软骨各层细胞形态以及软骨下骨、骨小梁排列走行。荧光显微镜下观察,可见关节周围软组织、软骨及骨组织呈绿色荧光,Ⅰ型胶原在骨组织表达,Ⅱ型胶原在软骨组织表达。HE染色及甲苯胺蓝染色能清晰分辨软骨层形态结构。茜素红染色示软骨下骨板、半月板内部组织结构完整,而且胫骨近端的皮质骨连续性存在。结论采用冰冻切片法制备不脱钙骨组织切片,可直接观察骨、软骨组织内荧光物质的分布,缩短骨组织切片的制备周期。
【作者单位】： 解放军总医院骨科研究所;南开大学医学院;
【关键词】： 冰冻切片 不脱钙骨组织 免疫荧光 大鼠
【基金】：国家重点基础研究发展计划(973)资助项目(2014CB-542201) 北京市科技专项资助项目(Z141107004414044)~~
【分类号】：R361.2
【正文快照】： 1 Institute of Orthopedics,General Hospital of Chinese PLA,Beijing,100853,P.R.China;2 Medical College of Nankai University.随着骨和软骨组织工程研究的深入,荧光标记的药物、修复材料和细胞应用越来越广泛[1]。通过荧光标记方法观察种子细胞、支架材料和药物的转归

【参考文献】

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1 章克萍;周莹;龙飞;;不同组织冰冻切片的制作方法[J];江西医学院学报;2006年04期

2 王勇平;李晓琴;张辉;蒋W，

本文编号：639290