狂犬病毒口服活疫苗的研制

发布时间：2017-08-21 00:26

  本文关键词：狂犬病毒口服活疫苗的研制

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【摘要】：人类与狂犬病的博弈已经由来已久，但是时至今日，人或者动物感染狂犬病毒后，如果未作任何医学处理，发病后的死亡率医学界公认接近100%。从理论上来说，现在公认的结果是，几乎所有的飞禽走兽都可以感染和传播狂犬病。但是最主要的传播者是犬、猫、鼠等。虽然狂犬病无法治愈，但是人们可以对其预防控制。 我国狂犬病疫情世界排名第二，仅次于印度，，最近几年，随着“宠物热”的出现我国狂犬病的发病情况呈现上升趋势，目前我国防治狂犬病的主要措施有以下两种方法:一种是捕杀法，易感动物的多少直接影响着狂犬病毒疫情的控制。但是捕杀法是一种很残酷的措施。只能在少数动物中实施。另一种是疫苗免疫法，是我国防治狂犬病的主要措施，目前我国主要采用注射用疫苗，但是注射型疫苗无法对野生动物大范围接种,不能形成免疫圈。而且疫苗价格高，需经过多次注射，注射过程冗繁。相较于注射用疫苗，口服疫苗可以在极大程度上克服以上缺点，口服疫苗方便、安全尤其适合散养犬及野生动物的免疫，有利于建立狂犬病毒免疫群。 基于以上问题，本课题分别从制剂学，免疫学方面展开对狂犬病毒口服疫苗的研究，以期能够为狂犬病毒曝露前免疫预防提供新的免疫疫苗。 研究目的：本研究以RV鸡胚低代毒(Flury-lep)为模型，海藻酸钠为缓释材料，剂型选择制备工艺简单的海藻酸钙缓释微丸，研制Flury株的口服疫苗。对制备出的口服疫苗进行安全性，有效性，无菌性研究。 研究方法：采用单因素实验和正交试验相结合的方法优化工艺处方，筛选最佳工艺处方制备出疫苗成品，转篮法测定成品的体外累积释放曲度，参照中国生物制品规程进行成品疫苗的无菌检验。采用MTT法研究口服疫苗细胞毒性试验，以WHO规定的方法研究口服疫苗体内毒性试验，以普通昆明小鼠为实验动物进行疫苗免疫效力实验,分别研究疫苗的体液免疫效果和细胞免疫效果。 研究结果：本课题制备出包封率78.64±2.144%，载药量17.49±1.43%的微丸，体外毒性试验表明微丸在每实验孔高达0.5mg的药量下，作用120h，仍然不会对L929细胞生长造成影响，体内试验结果表明小鼠正常生长，无明显异常反应。流式分析小鼠外周血淋巴细胞(?)和(?)数目，结果表明(?)和(?)数目分别由25.81±3.21%和20.51±2.26%上升到41.91±2.32%和25.70±2.11%，(?)/(?)的值也由1.26±0.31上升到1.63±0.68,说明小鼠有了较高的细胞免疫反应。体液免疫检测实验动物外周血中和抗体效价为1/80。无菌试验中各培养基未见细菌生长。 研究结论：本课题初步研究了以Flury株为模型的狂犬病口服疫苗，并得到了良好的免疫效果，能够为动物口服疫苗的研究提供一个新的研究方向。
【关键词】：狂犬病疫苗 Flury毒株 疫苗
【学位授予单位】：重庆理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R392
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-12
• 英文缩写12-13
• 第1章 绪论13-23
• 1.1 狂犬病毒的形态与结构特征13-14
• 1.2 狂犬病毒的检测14-16
• 1.2.1 传统的生物学检测方法15
• 1.2.2 检测狂犬病毒抗原15-16
• 1.2.3 检测狂犬病毒核酸16
• 1.3 狂犬病的流行病学特征16-18
• 1.3.1 狂犬病的临床表现16-17
• 1.3.2 我国狂犬病的流行特点17
• 1.3.3 狂犬病的分子流行病学特点17-18
• 1.4 狂犬病疫苗的研究进展18-19
• 1.4.1 亚单位疫苗18
• 1.4.2 合成肽疫苗18
• 1.4.3 DNA 疫苗18
• 1.4.4 基因重组减毒疫苗18-19
• 1.4.5 重组活载体疫苗19
• 1.5 狂犬病口服疫苗的研究原则19-23
• 1.5.1 狂犬病口服疫苗的主要研究类型20-21
• 1.6.1 研究背景和目标21-22
• 1.6.2 主要研究内容22
• 1.6.3 主要技术路线22-23
• 第二章 狂犬病毒的增殖和效价的测定23-29
• 2.1 实验材料、试剂和仪器23-24
• 2.1.1 主要实验动物，细胞和病毒23
• 2.1.2 主要实验试剂23
• 2.1.3 主要实验仪器和耗材23-24
• 2.1.4 主要溶液的配制24
• 2.2 实验方法24-25
• 2.2.1 BHK-21 细胞的培养24
• 2.2.2 病毒的接种24-25
• 2.2.3 采用 05 版药典规定的小鼠颅内接种实验测定病毒的滴度 LD5025
• 2.3 实验结果25-26
• 2.3.1 BHK-21 细胞的培养25
• 2.3.2 病毒的增殖及病毒滴度的测定25-26
• 2.4 本章讨论26-29
• 第三章 狂犬病毒海藻酸钠微丸的研制29-43
• 3.1 实验材料、试剂和仪器29-31
• 3.1.1 主要实验动物29
• 3.1.2 主要实验试剂29
• 3.1.3 主要实验仪器及厂家29-30
• 3.1.4 主要实验试剂的配制方法30-31
• 3.2 实验方法31-35
• 3.2.1 BRADFORD 法检测蛋白浓度标准曲线的建立31
• 3.2.2 增殖病毒的蛋白含量测定31-32
• 3.2.3 狂犬病毒口服疫苗微丸的工艺优化方法和质量评价标准32-33
• 3.2.4 狂犬病毒口服疫苗微丸工艺的单因素实验33
• 3.2.5 狂犬病毒口服疫苗微丸工艺的正交实验33-34
• 3.2.6 最佳工艺研制微丸的质量考察34-35
• 3.2.7 最佳工艺研制微丸的病毒滴度的测定35
• 3.3 实验结果35-40
• 3.3.1 bradford 法检测蛋白浓度标准曲线的建立35
• 3.3.2 增殖病毒液中蛋白含量的确定35
• 3.3.3 狂犬病毒口服疫苗微丸工艺的单因素实验35-37
• 3.3.4 狂犬病毒口服疫苗微丸工艺的正交实验结果37-38
• 3.3.5 最佳工艺制备的微丸：38-39
• 3.3.6 最佳工艺制备微丸的病毒滴度的测定39-40
• 3.4 本章讨论40-43
• 第四章 狂犬病毒口服疫苗的无菌试验43-47
• 4.1 实验材料、试剂和仪器43-45
• 4.1.1 主要实验试剂43
• 4.1.2 主要实验仪器43
• 4.1.3 主要试剂的配制43-45
• 4.2 实验方法45
• 4.3 实验结果45
• 4.4 本章讨论45-47
• 第五章 狂犬病毒口服疫苗的安全试验47-53
• 5.1 实验材料、试剂和仪器47-48
• 5.1.1 实验动物和细胞47
• 5.1.2 主要实验试剂47
• 5.1.3 主要实验仪器47-48
• 5.1.4 主要实验试剂的配制48
• 5.2 口服疫苗微丸的体外毒性试验48-49
• 5.2.1 L929 细胞的培养48
• 5.2.2 MTT 法测定口服疫苗微丸的体外毒性试验48-49
• 5.3 口服疫苗微丸的体内毒性试验49
• 5.4 实验结果49-50
• 5.4.1 口服疫苗微丸的体内毒性试验49-50
• 5.4.2 口服疫苗微丸的体外毒性试验50
• 5.5 本章讨论50-53
• 第六章 狂犬病毒口服疫苗的效力试验53-61
• 6.1 实验材料、试剂和仪器53-54
• 6.1.1 实验动物53
• 6.1.2 主要实验试剂53
• 6.1.3 主要实验仪器53
• 6.1.4 主要试剂的配制53-54
• 6.2 实验方法54-55
• 6.2.1 实验动物的免疫：54
• 6.2.2 免疫动物的细胞免疫实验：54-55
• 6.2.3 免疫动物的体液免疫实验：55
• 6.3 实验结果55-57
• 6.3.1 细胞免疫实验结果55-57
• 6.3.2 体液免疫结果57
• 6.4 本章讨论57-61
• 第七章 全文总结及后续工作建议61-63
• 7.1 全文总结61-62
• 7.2 后续工作建议62
• 7.3 展望62-63
• 参考文献63-67
• 个人简历、在学期间发表的学术论文及取得的研究成果67

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 李理;口服免疫机制及口服疫苗的研究进展[J];医学分子生物学杂志;2004年05期

2 姜燕;吕昌龙;;口服疫苗与肠粘膜免疫效应机制[J];国际免疫学杂志;2006年05期

3 陈阳;王宝华;伍丹;;聚丙烯酸树脂类辅料在制剂中的应用[J];中国药业;2007年14期

本文编号：709780