HPV16L1食管癌疫苗免疫效果的研究

发布时间：2017-08-29 16:40

  本文关键词：HPV16L1食管癌疫苗免疫效果的研究

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【摘要】：全世界每年约有30万人死于食管癌。我国食管癌发病率居世界第位，平均每年死亡15万人左右。调查资料显示，食管癌是多种因素长期协同作用所致的疾病，具体因素包括化学因素、环境因素、生物因素以及不良生活习惯等。越来越多的证据表明，人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)与食管癌的发生密切相关，是其重要的病毒学病因。因此，，抗HPV的疫苗也能发挥防治食管癌的作用。 HPV疫苗分为预防性和治疗性疫苗两种。预防性疫苗诱导机体产生中和抗体，对相应型别的高危类型的HPV预防率100%，但是针对其他型别HPV无预防作用，也不能消除体内已感染的HPV的细胞，无治疗功能。治疗性疫苗则通过激活细胞免疫来特异性地清除被病毒感染的细胞及相应的癌细胞，达到治疗疾病的目的。目前，治疗性疫苗多集中于针对E6/E7为靶抗原，但是E6/E7为癌基因。虽可通过改造去除转化活性，但安全性仍存在隐患，且改造后的E6/E7免疫原性明显低于野生型。本课题组的前期研究发现，在食管癌组织及分离的细胞株中检测到L1蛋白的表达，这为以L1蛋白为靶抗原的治疗性疫苗的开发提供了实验依据，且L1为结构蛋白，安全性好是理想的候选疫苗的靶蛋白。 本课题组构建了含有HPV16L1基因的重组DNA、重组腺病毒和重组腺相关病毒疫苗，并用制备的疫苗序贯重复免疫小鼠，分别通过假病毒中和滴定和酶联免疫斑点法检测疫苗特异性体液及细胞免疫应答。结果显示，用活体基因导入仪免疫重组DNA疫苗与普通注射相比细胞免疫增强5倍。重组腺相关病毒、重组腺病毒、重组DNA疫苗单独免疫小鼠均可产生强烈的体液免疫和细胞免疫反应，但持续时间较短，末次免疫后11周检测不到特异性细胞和体液免疫反应。DNA、重组腺相关病毒、重组腺病毒疫苗序贯重复免疫组可诱导更强而持久的特异性体液及细胞免疫应答，虽然在加强免疫后反应呈下降趋势，但在免疫后期，其下降速率明显变慢，免疫反应保护效力可维持更长的时间，显示了序贯重复免疫反应策略的有效性。
【关键词】：人乳头瘤病毒 食管癌 疫苗 细胞免疫
【学位授予单位】：北京工业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R392;R735.1
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 主要英文缩写词7-11
• 第1章 绪论11-19
• 1.1 HPV 及其研究现状11-15
• 1.1.1 HPV 与相关疾病11-12
• 1.1.2 HPV 疫苗研究进展12-14
• 1.1.3 方向和展望14-15
• 1.2 酶联免疫斑点反应15-17
• 1.3 序贯重复免疫17
• 1.4 本课题研究内容17-18
• 1.5 技术路线18-19
• 第2章 HPV16 L1 腺相关病毒和 DNA 疫苗的扩增纯化19-31
• 2.1 实验材料19-20
• 2.1.1 质粒、细胞和菌株19
• 2.1.2 工具酶及主要试剂19
• 2.1.3 主要仪器设备19-20
• 2.2 实验方法20-26
• 2.2.1 重组 DNA 疫苗的扩增和纯化20-21
• 2.2.2 pAAV-16L1 重组质粒转化、提取和鉴定21-23
• 2.2.3 重组腺相关病毒包装和纯化23-26
• 2.3 实验结果和讨论26-29
• 2.3.1 pAAV-16L1 重组质粒酶切鉴定和测序结果26-27
• 2.3.2 pAAV-16L1 重组质粒表达蛋白鉴定27-28
• 2.3.3 纯化的 rAAV2/1-mod.HPV16L1 衣壳蛋白鉴定28
• 2.3.4 纯化的 rAAV2/1-mod.HPV16L1 电镜观察28-29
• 2.3.5 纯化的 rAAV2/1-mod.HPV16L1 滴度测定29
• 2.4 本章小结29-31
• 第3章 重组疫苗免疫效果的研究31-55
• 3.1 实验材料31-32
• 3.1.1 细胞和疫苗31
• 3.1.2 要试剂31
• 3.1.3 主要仪器设备31-32
• 3.1.4 实验动物32
• 3.2 实验方法32-38
• 3.2.1 动物实验的设计32-34
• 3.2.2 多载体疫苗免疫反应的检测34-38
• 3.3 实验结果和讨论38-54
• 3.3.1 T 细胞表位肽38-39
• 3.3.2 活体基因导入仪与普通注射免疫效果比较39-41
• 3.3.3 不同剂量重组腺病毒疫苗细胞免疫效果的比较41
• 3.3.4 HPV16L1 单种疫苗接种诱导的细胞免疫反应41-43
• 3.3.5 HPV16L1 多载体疫苗接种诱导的细胞免疫反应43-46
• 3.3.6 HPV16L1 特异性细胞免疫反应的动态变化趋势46-48
• 3.3.7 HPV16L1 单种疫苗接种诱导的体液免疫反应48-50
• 3.3.8 HPV16L1 多载体疫苗接种诱导的体液免疫反应50-52
• 3.3.9 HPV16L1 特异性体液免疫反应的动态变化趋势52-54
• 3.4 本章小结54-55
• 结论55-57
• 参考文献57-61
• 攻读硕士学位期间的主要成果61-63
• 致谢63

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 田厚文,韩立群,任皎,骆卫峰,陆振华,阮力;HPV16型E7复制型DNA疫苗诱发的抗肿瘤免疫反应[J];病毒学报;2003年01期

2 焦庆f ;易发平;汪长东;袁成福;刘勒;兰欢;符少月;艾青;宋方洲;;HPV 16 E6E7基因修饰树突状细胞疫苗诱导CTL致CaSki细胞凋亡体外实验研究[J];中国免疫学杂志;2011年02期

本文编号：754379