骨桥蛋白对骨髓间充质干细胞增殖及迁移功能的影响研究

发布时间：2017-08-31 02:14

  本文关键词：骨桥蛋白对骨髓间充质干细胞增殖及迁移功能的影响研究

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【摘要】：目的： 本实验分别利用OPN慢病毒及蛋白处理骨髓间充质干细胞，检测内源性及外源性OPN表达差异导致的骨髓间充质干细胞增殖及迁移功能的变化，，从而比较OPN对骨髓间充质干细胞功能的影响。 方法： 1.分别分离培养新生OPN基因敲除型及野生型C57BL/6小鼠(鼠龄一天)的骨髓间充质干细胞。培养后行流式、PCR、WB鉴定； 2.提取野生型成年小鼠OPN基因后构建OPN质粒并通过氯化钙-氯喹法进行慢病毒包装； 3.慢病毒感染细胞，并行定量PCR及WB检测各细胞内OPN表达量的变化。 4.分别利用外源性OPN蛋白及OPN慢病毒处理细胞后用CCK8法检测细胞的增殖能力改变。 5.同样分组利用Transwell小室检测骨髓间充质干细胞迁移能力变化。 结果： 1.镜下见骨髓内分离的细胞生长状态良好，呈漩涡状排列。流式细胞仪检测示细胞纯度高，PCR、WB鉴定结果显示OPN基因敲除型小鼠无OPN基因及蛋白的表达，而野生型小鼠可正常表达； 2.从成年小鼠肾脏提取的OPN基因长度约为900bp。将此基因片段插入慢病毒载体后，经氯化钙-氯喹方法进行质粒包装后获得滴度为2.5×108TU/ml的含OPN基因片段的慢病毒及空载体慢病毒； 3.慢病毒分别感染基因敲除型及野生型小鼠的骨髓间充质干细胞后荧光镜下可细胞均有荧光产生，经定量PCR及WB检测OPN呈梯度表达； 4.CCK8检测结果提示无论是外源性OPN蛋白作用还是内源性OPN基因作用，均能提高骨髓间充质干细胞的增殖能力； 5.Transwell小室迁移实验显示外源性及内源性OPN表达的增高均能导致骨髓间充质干细胞迁移能力的增强。 结论： 内源性及外源性骨桥蛋白均能够促进骨髓间充质干细胞的增殖及迁移功能。
【关键词】：骨桥蛋白 骨髓间充质干细胞 增殖 迁移
【学位授予单位】：蚌埠医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 第一部分 前言10-12
• 第二部分 骨髓间充质干细胞的分离培养及鉴定12-23
• 2.1 材料及方法12-18
• 2.2 结果18-21
• 2.3 讨论21-23
• 第三部分 OPN 质粒的构建及慢病毒包装23-33
• 3.1 材料及方法23-28
• 3.2 结果28-31
• 3.3 讨论31-33
• 第四部分 慢病毒感染骨髓间充质干细胞及鉴定33-38
• 4.1 材料及方法33-35
• 4.2 结果35-37
• 4.3 讨论37-38
• 第五部分 骨桥蛋白对骨髓间充质干细胞增殖功能的影响38-42
• 5.1 材料及方法38-39
• 5.2 结果39-41
• 5.3 讨论41-42
• 第六部分 骨桥蛋白对骨髓间充质干细胞迁移功能的影响42-47
• 6.1 材料及方法42-43
• 6.2 结果43-46
• 6.3 讨论46-47
• 全文结论47-48
• 参考文献48-50
• 致谢50-51
• 附录51
• 英文注解51-52
• 个人简历52-53
• 攻读学位期间发表文章情况53-54
• 小综述54-60
• 参考文献57-60

【参考文献】

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本文编号：762850